[发明专利]一种共载化学抗肿瘤药物和anti‑Fas抗体的纳米载药体系的制备方法

摘要

本发明涉及一种基质金属蛋白酶响应的共载化学抗肿瘤药物和anti‑Fas抗体智能型纳米载药体系的制备方法，首先利用EDC/NHS偶联试剂将官能化的聚己内酯分别与甲氧基聚乙二醇肽链、羧化氨基聚乙二醇反应生成mPEG‑Pep‑PCL及PEG‑PCL‑COOH，然后将纳米沉淀法合成的负载小分子抗肿瘤药物纳米粒子与mPEG‑Pep‑PCL及PEG‑PCL‑COOH溶解在二氯甲烷中，搅拌后逐滴加入40℃纯水中，超声后室温下搅拌除去二氯甲烷制得基质金属蛋白酶响应的负载小分子抗肿瘤药物智能型纳米颗粒。通过EDC/MES和NHS/MES溶液活化纳米粒子表面NH2‑PEG‑COOH羧基后加入anti‑Fas抗体反应，分离纯化后即制成基质金属蛋白酶响应的共载小分子抗肿瘤药物和anti‑Fas抗体智能型纳米载药体系。

主权项

一种基质金属酶响应的anti‑Fas抗体智能型纳米载药体系的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：a.通过开环聚合法制备官能化的聚己内酯PCL‑COOH和PCL‑NH2；b.制备甲氧基聚乙二醇肽链mPEG–Pep，然后将步骤a中制得的PCL‑NH2和mPEG‑Pep、DMAP、EDC、NHS混合反应，透析后将透析袋中截留液体冻干,制得mPEG–Pep‑PCL；c.将步骤a中制得的PCL‑COOH和NHS、EDC混合溶于DMF溶液中反应，随后纯水中透析，透析袋中液体冻干，制得PCL‑NHS粉末；将PCL‑NHS、氨基‑聚乙二醇‑羧基溶于DMF溶液反应，随后混合液在透析袋中透析，透析袋中液体冻干，制得PCL‑PEG‑COOH粉末；d.采用纳米沉淀法制备包载小分子抗肿瘤药物的纳米粒,将步骤b制得mPEG–Pep‑PCL、步骤c制得PCL‑PEG‑COOH和小分子抗肿瘤药物溶解在溶剂中,然后将混合溶液逐滴加到纯水中，随后将混合溶液超声、搅拌4‑8分钟形成乳液；通过蒸发除去溶剂，制得包载小分子抗肿瘤药物的mPEG–Pep‑PCL@PCL‑PEG‑COOH的智能型纳米粒子(小分子抗肿瘤药物‑loaded NPs)；e.将步骤d制得小分子抗肿瘤药物‑loaded NPs粉末在pH4.5～5.5的N‑吗啉乙磺酸溶液中，加入含0.1mol/L EDC的MES溶液和含0.1mol/L NHS的MES溶液，活化智能型纳米粒子表面PCL‑PEG‑COOH的羧基；搅拌后将活化的纳米粒子悬浮液离心，收集纳米粒子；随后将纳米粒子在0.1mol/L磷酸盐缓冲液中重悬；洗去未参与反应的EDC和NHS，最终将纳米粒子在1ml PBS溶液中重悬，加入anti‑Fas抗体反应40‑50小时；离心除去未连接抗体，制得基质金属蛋白酶响应的共载小分子抗肿瘤药物和anti‑Fas抗体的智能型纳米载药体。