[发明专利]一种脯氨酸内切酶的制备方法有效
| 申请号： | 201710069338.6 | 申请日： | 2017-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN106676087B | 公开（公告）日： | 2018-02-06 |
| 发明（设计）人： | 田健;潘叶羽;施碧赢;诸辉 | 申请（专利权）人： | 宁波希诺亚海洋生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/62 | 分类号： | C12N9/62 |
| 代理公司： | 宁波市鄞州甬致专利代理事务所(普通合伙)33228 | 代理人： | 代忠炯 |
| 地址： | 315700 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种脯氨酸内切酶的制备方法，包括黑曲霉种液制备、培养发酵、发酵液提取处理种液制备所用培养基为BMGY液体培养基，培养条件为28‑35℃、200‑250r/min摇瓶培养，培养时间为12‑18h；将制得的种液摇瓶培养，培养基为黑曲霉高密度发酵培养基，培养条件为28‑35℃，200‑250r/min，或者将制得的种液发酵罐培养，培养基为黑曲霉高密度发酵培养基，培养条件为28‑35℃，200‑800r/min；发酵液经过滤、浓缩、调配后，精滤或者干燥得到液体脯氨酸内切酶或固体脯氨酸内切酶。本发明采用天然的黑曲霉菌种，以脯氨酸为诱导底物，在温和的发酵条件下制备得到酶活高、温度和pH适应范围宽、稳定性良好的脯氨酸内切酶。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 脯氨酸 内切酶 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种脯氨酸内切酶的制备方法，其特征在于，步骤包括黑曲霉种液制备、以脯氨酸为诱导表达底物培养发酵、发酵液提取处理；所述种液制备具体步骤为：将黑曲霉菌种于培养基活化后，取菌种接入BMGY液体培养基中，28‑35℃、200‑250r/min 摇瓶培养12‑18h，至菌体OD600nm为2‑3，得到种液；所述培养发酵第一种方法步骤为：将制得的种液离心收集菌体，接入黑曲霉高密度发酵培养基中，28‑35℃，200‑250r/min摇瓶培养发酵，每隔16‑48h补加浓度为0.1‑0.5mg/L的脯氨酸，发酵时长96‑200h；或者，所述培养发酵第二种方法步骤为：将制得的种液，接入黑曲霉高密度发酵培养基中，28‑35℃、200‑800r/min发酵罐培养发酵，根据发酵罐pH和溶氧的状态调整补加脯氨酸的流速，发酵时长96‑200h。
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