[发明专利]一种鉴定尖吻蝮蛇毒出血毒素种数的简便方法

摘要

本发明公开了一种鉴定尖吻蝮蛇毒出血毒素种数的简便方法，先制备梯度聚丙烯酰胺凝胶两块，按常规方法配制浓缩胶，不加梳子，制得两块相同的凝胶板块；然后将2块分别插进完全相同的两个电泳槽中，在向每个电泳槽加预处理好的尖吻蝮蛇毒，其中一块电泳板正常电泳，另一块电泳板正、负极对调，二块板同时电泳，正常电泳板中溴酚蓝到达凝胶底部后，电泳同时结束，取下两块凝胶先染色在用蒸馏水脱色，直到清晰地出现蛋白质蓝色条带为止，将每个蛋白质条带切割下来，加人生理盐水于研钵中磨细，再注射到小鼠腹部皮下，1h后解剖，观察有几条出血明显的条带，即表示尖吻蝮蛇含多少种出血毒素。本发明方法检测过程方便、结果稳定，检测时间短。

主权项

1.一种鉴定尖吻蝮蛇毒出血毒素种数的简便方法，其特征在于，包括以下步骤：a、制备5‑20%梯度聚丙烯酰胺分离胶二块，凝固后的胶从上到下浓度逐渐增大，凝胶的孔径逐渐减小，按常规方法配制浓缩胶，不加梳子；b、将制好的电泳板，每个电泳槽加浓度40‑60mg/mL 尖吻蝮蛇毒1.0 mL，其中一块电泳板正常电泳，酸性蛋白质进入凝胶，另一块电泳板正、负极对调，碱性蛋白质进入凝胶，二块板同时电泳，正常电泳板中溴酚蓝到达凝胶底部后，电泳同时结束，取下凝胶，放塑料盒中待染色；c、用生工生物工程（上海）股份有限公司生产的“高灵敏快速考马斯亮蓝染色试剂盒，产品编号：C510041”染色，染色时间从30分钟缩短为6分钟，用蒸馏水代替试剂盒中的脱色液脱色，直到清晰地出现蛋白质蓝色条带为止；d、对每个蛋白质条带，用手术刀切下2.5 cm蛋白条带，加0.2 mL生理盐水于研钵中磨细，注射到小鼠腹部皮下，1h后解剖观察是否出血，出血明显的条带既为一种出血毒素，总共有多少出血明显的条带表示尖吻蝮蛇毒含多少种出血毒素。