[发明专利]一种表达人α1‑抗胰蛋白酶的重组细胞株及其应用

摘要

本发明属于生物技术领域，具体公开了一种表达人α1‑抗胰蛋白酶的细胞株及其应用。该重组细胞具体是将人α1‑抗胰蛋白酶的基因定点整合到体细胞19号染色体的AAVS1位点，并切除筛选标记，获得切除了筛选标记且稳定表达重组α1‑抗胰蛋白酶的体细胞。该重组细胞株中人α1‑抗胰蛋白酶基因定点插入到人19号染色体的AAVS1位点，避免了传统基因随机插入导致的基因沉默等问题；该细胞株能够表达人α1‑抗胰蛋白酶，所得的人α1‑抗胰蛋白酶的结构和功能更类似于天然的α1‑抗胰蛋白酶，更有利于人α1‑抗胰蛋白酶制剂的推广和应用。

主权项

一种表达人α1‑抗胰蛋白酶的重组体细胞株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)获得含人α1‑抗胰蛋白酶基因序列、筛选标记基因序列、AAVS1位点左、右同源臂序列的表达质粒，表达质粒中所述人α1‑抗胰蛋白酶基因序列、筛选标记基因序列在所述AAVS1位点的左、右同源臂之间；在表达质粒的筛选标记基因的两侧分别插入一个LoxP序列，且这两个LoxP序列的方向一致，得到改造的表达人α1‑抗胰蛋白酶的重组质粒；(2)将步骤(1)改造的重组质粒和靶向AAVS1位点的CRISPR/Cas9质粒共转染人的体细胞，筛选获得定点整合的体细胞；(3) 以表达Cre酶的质粒转染步骤(2)获得的定点整合的体细胞，通过Cre/LoxP系统切除筛选标记，筛选获得切除了筛选标记且稳定表达重组α1‑抗胰蛋白酶的体细胞株。