[发明专利]一种从瘤胃液中获得硝酸盐还原菌的方法

摘要

本发明涉及一种从瘤胃液中获取硝酸盐还原菌的方法，属于微生物研究技术领域。本发明方法包括制备瘤胃硝酸盐还原菌纯培养发酵液、制备富集培养液、接种培养的步骤。本发明利用选择性培养基，特定去氧剂，可实现每毫升含活菌数达≥106。本发明所述瘤胃硝酸盐还原菌的制备方法，避免了使用硫化钠可能产生的黑色沉淀颗粒，同时实现了菌的富集扩繁，提高了总菌含量，为科研提供材料。

主权项

一种从瘤胃液中获得硝酸盐还原菌的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)制备瘤胃硝酸盐还原菌纯培养发酵液首先配制基础培养基：按超纯水：氯化钠：氯化镁：氯化钙：氯化锰：硫酸亚铁：氯化锌：氯化钴：酵母提取物：刃天青＝100：110～130：10～12：8～10：3～5：2～4：1～2：0.3～0.5：19～23：19～23的质量比在超纯水中加入各成分配制溶液；待完全溶解后，加入2.5％半胱氨酸盐酸盐、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、异丁酸、异戊酸，它们与上述溶液总体积的体积比例为1～2：0.18～0.19：0.06～0.07：0.015～0.018：0.015～0.018：0.015～0.018：0.015～0.018：100；用食碱调整pH为6.8～7.0，整个配制过程持续通入无氧CO2,在分装前加入2％的硝酸钾，待溶解后，按15ml体积，分装入50ml厌氧培养管，密封并封口后，在121～123℃温度条件下灭菌处理，冷却到38±1℃接入瘤胃液，在39℃发酵，制得对数期硝酸盐还原菌发酵液；将该菌液纯化转代培养至5～7代后，即可进行下一步富集培养；(2)制备富集培养液制备富集扩繁培养液，配方同步骤(1)，将所有成分按相对比例加入厌氧发酵罐中，该罐内持续通入无氧CO240～60分钟；用蠕动泵以0.22μm滤膜负压过滤至灭菌后的空发酵瓶中，制备富集培养液；(3)将步骤(1)制备的对数期发酵液转入步骤(2)的富集培养液中，对数发酵液的加入量为5％；通无氧CO2，接种后快速密封，于38±1℃培养至对数生长期。