[发明专利]对用于产生能生育的XY雌性小鼠的多能细胞的选择

摘要

提供用于产生F0能生育的XY雌性动物的方法和组合物。方法和组合物涉及制备能够在F0代中产生能生育的雌性XY动物的XY多能或全能动物细胞、体外细胞培养物或胚胎。所述细胞、胚胎和动物可通过使Y染色体的区域沉默来制备。任选地，细胞也可在雌性化培养基诸如低克分子渗透压重量浓度培养基中培养，和/或可被修饰以使Sry蛋白的水平和/或活性降低。也提供用于通过在雌性化培养基中维持XY多能或全能动物细胞来使XY多能或全能动物细胞或源于其的体外细胞培养物、胚胎或动物中的Y染色体的区域沉默的方法和组合物。也提供用于在雌性化培养基中维持XY多能或全能动物细胞的群体和选择在F0代中产生能生育的雌性XY动物的能力增加的细胞或克隆的方法和组合物。也提供用于筛选具有雌性化活性的化合物或用于使雌性化培养基中的组分的浓度优化的方法和组合物。

主权项

1.一种用于在非人哺乳动物XY多能细胞中筛选靶标化合物的雌性化活性的方法，其包括：(a)在包含基础培养基和适于维持所述非人哺乳动物XY多能细胞的多能性的补充物的培养基中培养第一群体的非人哺乳动物XY多能细胞和第二群体的非人哺乳动物XY多能细胞，其中在靶标化合物存在下培养所述第一群体，并且在不存在所述靶标化合物下培养所述第二群体；(b)测定所述第一群体的非人哺乳动物XY多能细胞和所述第二群体的非人哺乳动物XY多能细胞的每一个中的一个或多个所述非人哺乳动物XY多能细胞的Ddx3y、Uty和Eif2s3y中的一者或多者的表达和/或活性，借此通过相较于来自所述第二群体的所述一个或多个非人哺乳动物XY多能细胞，来自所述第一群体的所述一个或多个非人哺乳动物XY多能细胞中的Ddx3y、Uty和Eif2s3y中的所述一者或多者的表达和/或活性的降低来鉴定雌性化活性；(c)基于Ddx3y、Uty和Eif2s3y中的所述一者或多者的表达和/或活性来从所述第一群体选择用于在F0代中产生能生育的呈表型雌性的XY非人哺乳动物的供体非人哺乳动物XY多能细胞，其中所述能生育的呈表型雌性的XY非人哺乳动物在所述F0代中的比例与Ddx3y、Uty和Eif2s3y中的所述一者或多者的表达和/或活性逆相关；(d)将所述供体非人哺乳动物XY多能细胞引入宿主胚胎中；(e)将来自步骤(d)的所述宿主胚胎引入接受者雌性非人哺乳动物中以及孕育所述宿主胚胎；和(f)获得包括呈表型雌性的XY非人哺乳动物的F0XY非人哺乳动物子代，其中在达到性成熟后，所述F0呈表型雌性的XY非人哺乳动物能生育且生殖力旺盛。