[发明专利]一种用于增强记忆力的血浆提取物及其制备方法和应用

摘要

本发明属于分子生物学领域，提供一种用于增强记忆力的血浆提取物及其制备方法和应用。所述血浆提取物包括多种蛋白质和多种小分子；所述血浆分离物的SDS‑PAGE变性胶电泳至少包括5条肉眼清晰可见的条带，所述条带的分子量分别为：25kD、35kD、50kD、69kD、105kD。其制备方法包括以下步骤：血浆收集、分子量截留、SD灭活、离心分离、阴离子交换、透析、浓缩。本发明制备的血浆提取物可以用于预防、改善和治疗老年痴呆症，此外其还可以起到增强记忆力的作用。

主权项

1.一种用于增强记忆力的血浆提取物，其特征在于：所述血浆提取物包括多种蛋白质和多种小分子；所述血浆提取物的SDS‑PAGE变性胶电泳至少包括5条肉眼清晰可见的条带，所述条带的分子量为：25kD、35kD、50kD、69kD、105kD；所述血浆提取物的制备方法依次包括以下步骤：血浆收集、低温过滤、低温超滤、分子量截留、SD灭活、离心分离、阴离子交换、透析、浓缩；所述低温过滤步骤中，在压力条件下将所述血浆进行过滤，得到滤液，其中所述过滤使用的滤膜的孔径为0.22微米或0.45微米；所述低温超滤步骤中，将所述滤液通过施加压力进行膜包超滤，得到低温超滤产物，其中所述膜包截留分子量为3kD‑10kD，所述超滤使用的缓冲液为100mM、pH值为8.0的Tris‑盐酸缓冲液；所述分子量截留步骤中，将所述低温超滤产物通过浓缩管或浓缩杯施加压力进行分子量截留，得到分子量截留产物；其中，所述浓缩管或浓缩杯允许10‑50kD的物质通过；所述SD灭活步骤中，将所述分子量截留产物用SD灭活剂重新悬浮后静置，得到灭活产物；其中，所述静置温度为4～28℃，时间为6～24小时；所述SD灭活剂含有0.3～2vol％的N‑丁基三磷酸盐、0.5～2vol％的吐温；所述离心分离步骤中，将所述灭活产物离心后保留上清液，得到离心分离产物；其中，离心力为2000‑5000g，时间为10‑20分钟，温度为0‑6℃；所述阴离子交换步骤中，将离心分离产物加入阴离子交换柱中进行步级洗脱，收集洗脱液，混合后得到阴离子交换产物；所述步级洗脱中，先用第一次洗脱缓冲液洗脱，得到第一次洗脱液；再用第二次洗脱缓冲液洗脱，得到废液；再用第三次洗脱缓冲液洗脱，得到第三次洗脱液；合并所述第一次洗脱液和第三次洗脱液，得到阴离子交换产物；所述第一次洗脱缓冲液、第二次洗脱缓冲液、第三次洗脱缓冲液，均为浓度为100mM、pH值为8.0的Tris‑盐酸缓冲液；且所述第一次洗脱缓冲液中含有100‑150mM的氯化钠，所述第二次洗脱缓冲液含有250‑300mM的氯化钠，所述第三次洗脱缓冲液含有450‑500mM的氯化钠；所述透析步骤中，将所述阴离子交换产物进行透析，收集透析容器中的产物得到透析产物；所述透析容器的孔径为0.25nm，所述透析使用的透析缓冲液为Tris‑盐酸缓冲液；所述Tris‑盐酸缓冲液的浓度为1mM、pH值为8.0；所述透析的时间为20‑72h；所述透析的体积比是1：(100‑10000)；在所述浓缩步骤中，将所述透析产物进行浓缩，得到浓缩产物，其中，所述浓缩采用浓缩管离心，所述浓缩管允许1.5‑3.5KD的物质通过；或者所述浓缩是采用浓缩杯加压，所述浓缩杯允许1.5‑3.5KD的物质通过。