[发明专利]一种丝素荧光探针的制备方法

摘要

本发明公开了一种丝素荧光探针的制备方法。用丝素材料对噬菌体库进行筛选，得到与丝素蛋白特异性结合的噬菌体，进行基因测序，将测序获得的基因对应的氨基酸序列作为丝素亲和肽一级序列，通过多肽合成技术对丝素亲和肽一级序列进行多肽合成，得到丝素亲和肽粉，将丝素亲和肽粉和荧光素结合，得到丝素荧光探针。本发明所筛选的噬菌体对丝素材料具有很高的亲和性，探针灵敏度高，检测速度快，应用前景广泛，为丝素蛋白及丝素材料的高效靶向、鉴定提供更多的选择。

主权项

1.一种丝素荧光探针的制备方法，其特征是采用如下步骤：1)用丝素材料对噬菌体库进行筛选，得到与丝素蛋白特异性结合的噬菌体；2)对步骤1)获得的与丝素蛋白特异性结合的噬菌体进行基因测序，将测序获得的基因对应的氨基酸序列作为丝素亲和肽一级序列；3)通过多肽合成技术对步骤2)得到的丝素亲和肽一级序列进行多肽合成，得到丝素亲和肽粉；4)将步骤3)得到的丝素亲和肽粉和荧光染料结合，得到丝素荧光探针；所述步骤1)具体为：a.封闭丝素材料：将丝素材料加入含有TBS和BSA的缓冲液；b.丝素材料对噬菌体库的筛选：将噬菌体肽加入到丝素膜的缓冲液中，常温摇床中以160rpm转速下摇振0.5‑8h；c.洗涤：用洗涤液将丝素膜洗涤1‑10遍；d.洗脱：将洗涤液除去，加入洗脱液常温孵育1‑20分钟，将与丝素材料特异性结合的噬菌体洗脱下来；e.中和：加入中和液，使得洗脱后的噬菌体液与中和液混匀后呈中性；f.噬菌体扩增：将中和后的噬菌体液转入到ER2738菌中，在37℃温度的摇床中以150‑220rpm转速摇振3‑24h，得到噬菌体和ER2738菌混合液；g.噬菌体纯化：将噬菌体和ER2738菌混合液进行离心，再加入到PEG和NaCl的混合液中进行纯化，得到亲和丝素材料的噬菌体菌液；i.上述步骤a～g过程为一次循环，将步骤a～g经过2‑6次重复循环之后，得到与丝素材料特异性结合的噬菌体液；所述步骤a中的丝素材料采用以下方式进行制备：先将蚕丝蛋白粉末溶于有机溶剂或者水中形成蚕丝蛋白溶液，将蚕丝蛋白溶液滴在聚乙烯板上风干，加酒精处理使蚕丝蛋白固化，得到不溶解于水的丝素膜。