[发明专利]一种蕨类孢子灭菌及接种方法

摘要

本发明公布了一种蕨类孢子的消毒及接种方法，结合组织培养技术的灭菌方法和DNA纯化柱等工具，设计了一套适用于微量蕨类孢子的灭菌和接种方法，适于离体保存过程中应用。该技术克服了蕨类植物孢子在消毒过程中易出现的灭菌不充分、混种及消毒液残留的问题，可有效降低污染率，提高接种效率。本发明的优点是能高效地进行微量的蕨类孢子的消毒和接种，实验器材易得、成本低廉、操作方便、接种效率高等。

主权项

一种蕨类孢子的消毒及接种方法，其特征在于该方法先收集蕨类孢子，把蕨类孢子叶装入硫酸纸袋中，标记代号后置于通风干燥处，待孢子自由脱落；把DNA纯化柱，规格：吸附柱1ml、收集管2ml、1ml枪头、纯净水在121℃高温灭菌20‑30min备用；用对折过的硫酸纸收集脱落在纸袋中的孢子，简单的去除杂质碎叶、环带、鳞毛后沿着折痕倒入已灭菌的吸附柱中，盖好盖子，放入收集管中，并做好标记，放置于离心管架上；在无菌条件下，加入600μl 75％乙醇，倒立纯化柱1‑2次，之后200‑1200rpm离心20s；从加乙醇开始，直到完成离心，整个操作过程控制在25‑35s内；倒弃收集管中废液，在无菌条件下加入600μl无菌水，反复吸打溶液使孢子悬浊，充分漂洗孢子，然后200‑1200rpm离心20s，重复1‑2次，洗脱乙醇；倒弃收集管中废液，在无菌条件下加入600μl 0.1‑0.2％氯化汞灭菌2‑4min或2％次氯酸钠消毒6‑8min，反复吸打溶液使孢子悬浊充分灭菌，然后200‑1200rpm离心20s；倒弃收集管中废液，在无菌条件下加入600μl无菌水，反复吸打使孢子悬浊，充分漂洗孢子，然后200‑1200rpm离心20s，此操作重复3‑4次，使消毒液彻底洗脱；再向离心之后的吸附柱中添加600μl无菌水，反复吸打使之呈孢子悬浊液，吸取100μl孢子悬浊液接种到培养基上，实现接种。