[发明专利]用于荧光液滴检测中荧光强度数据的处理方法

摘要

本发明公开了一种用于荧光液滴检测中荧光强度数据的处理方法，其用于基于荧光液滴的核酸检测，包括以下步骤：1)获取所有荧光液滴的荧光强度的数据，并进行预处理；2)对数据进行首次分类，3)根据首次分类的结果得出阴性液滴和阳性液滴荧光强度分布；4)计算最终判决阈值t；5)利用所述判决阈值t对数据进行二次分类；6)计算样品浓度。本发明的方法对数字PCR荧光微滴荧光强度分布进行了准确描述，能够在无需阴性对照的情况下自动确定合适的阈值从而识别阳性微滴的数量，能有效提高数据分类的准确率，从而能显著提高荧光液滴检测结果的精确性。

主权项

1.一种用于荧光液滴检测中荧光强度数据的处理方法，其特征在于，包括以下步骤：1)获取所有荧光液滴的荧光强度的数据，并进行预处理；2)对所述步骤1)中的数据进行首次分类，得到阳性液滴和阴性液滴的首次分类范围，所述首次分类的方法包括传统聚类算法或基于模型的聚类算法；3)根据所述步骤2)的首次分类结果得出阴性液滴和阳性液滴荧光强度分布，再利用极大似然估计方法分别将阴性液滴和阳性液滴荧光强度分布拟合为单参数正态分布，再根据各自的正态分布结果分别计算其统计特性值，包括峰值、均值和标准差；4)根据判决公式：t＝p_n+α·σ计算最终判决阈值t，其中p_n为阴性液滴强度峰值，α为调整因子，σ为阴性荧光强度分布的标准差；5)利用所述判决阈值t对所述步骤1)中的数据进行二次分类，识别阳性液滴与阴性液滴，并计算阳性液滴占总液滴的比例，再根据泊松公式：计算出平均每滴液滴中的待测物拷贝数，其中为平均每滴液滴中的待测物浓度，为阳性液滴占总液滴的比例，H为阳性液滴数，C为液滴总数；6)根据浓度计算公式：计算出样品中的待测物浓度，其中Con为样品中的待测物浓度，V_d 为液滴体积。