[发明专利]Ii基因序列在猪流行性腹泻病毒基因疫苗中的应用

摘要

本发明涉及基因疫苗技术领域，特别涉及一种Ii基因序列在猪流行性腹泻病毒基因疫苗中的应用，Ii基因碱基序列见序列表中序列8。将Ii基因载体和S1（m）基因载体混合或者将Ii基因与S1（m）基因连接后用于猪流行性腹泻病毒基因疫苗的制备，S1（m）基因碱基序列见序列表中序列10。在经密码子优化的S1基因的基础上，成功构建了真核表达质粒pVAX‑S1（m）和pVAX‑Ii‑S1（m），小鼠免疫试验验证S1蛋白的免疫原性和Ii作为分子佐剂在提高体液和细胞免疫中发挥的作用，首免后63d出现特异性抗体，首免后84d抗体明显升高，为研制PEDV疫苗提出新的思路，为猪体试验奠定了基础。

主权项

1.Ii基因序列在制备猪流行性腹泻病毒基因疫苗中的应用，将Ii基因与猪流行性腹泻病毒S1（m）基因连接后用于猪流行性腹泻病毒基因疫苗的制备，所述Ii基因碱基序列见序列表中序列8，S1（m）基因碱基序列见序列表中序列10；具体见如下操作：（1）设计并合成用于扩增Ii基因的引物，见序列表中序列6和7，设计并合成用于扩增口蹄疫2A基因的Ii基因Ii‑2A的引物，见序列表中序列1、2和3，设计并合成用于扩增猪流行性腹泻病毒S1（m）基因的引物，见序列表中序列4和5；（2）提取猪脾脏RNA，以反转录得到的cDNA为模板，用序列表中序列6和7经PCR扩增得到Ii基因，碱基序列见序列表中序列8；以得到的Ii基因为模板，分别用序列表中序列1和2、序列表中序列1和3经PCR逐步扩增得到Ii‑2A基因，碱基序列见序列表中序列9；以优化合成的S1（m）基因为模板，用序列表中序列4和5经PCR扩增得到S1（m）基因，碱基序列见序列表中序列10；（3）将Ii‑2A基因与S1（m）基因连接，并连接入质粒pVAX得到重组质粒pVAX‑Ii‑2A‑ S1（m）。