[发明专利]一种何首乌叶原生质体的制备方法在审
| 申请号： | 201611120704.8 | 申请日： | 2016-12-08 |
| 公开（公告）号： | CN106520667A | 公开（公告）日： | 2017-03-22 |
| 发明（设计）人： | 张俊 | 申请（专利权）人： | 陕西易阳科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 西安亿诺专利代理有限公司61220 | 代理人： | 康凯 |
| 地址： | 710000 陕西省西安*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种何首乌叶原生质体的制备方法，其特征在于包括以下步骤何首乌叶片经过质壁分离后切成0．5厘米宽的长条，转入到25％蔗糖溶液中放置8min，在35℃水浴锅中处理何首乌叶片30win，过滤后得到原生质体溶液；本发明所述方法制备的何首乌叶原生质体，活性强，融合效率高，可工业化生产，实用性强。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 何首乌 原生 质体 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种何首乌叶原生质体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）何首乌叶片经过质壁分离后切成0．5厘米宽的长条，转入到25％蔗糖溶液中放置8min，在35℃水浴锅中处理何首乌叶片30win，过滤后得到原生质体溶液；（2）原生质体经过27％蔗糖溶液洗涤一次，再用13％甘露醇CPW溶液悬浮；（3）悬浮液原生质体可用牛氏记数板记数和细胞融合；（4）原生质体得率=记数室大方格原生质体的平均个数×104个(Fw)；（5）经过质壁分离法获得的原生质体溶液，l500r／rain下离心8win，沉淀用少量13％甘露醇CPW溶液悬浮，为原生质体溶液；（6）用吸管取原生质体悬浮液滴两滴在载玻片上，静置几分钟，使原生质体在载玻片上产生一薄层；（7）取PEG融合液两滴，缓慢滴加到载玻片上的原生质体溶液中，再静置一定时间，观察载玻片原生质体问的粘连；（8）每隔5min，用吸管向原生质体液中滴两滴高Ca2+高pH溶液，共3次；（9）盖上盖玻片，用吸水纸吸去多余的溶液即成临时装片后即可。
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