[发明专利]一种三棱多酚类成分的HPLC指纹图谱的鉴定方法及含量测定方法

摘要

本发明涉及一种三棱多酚类成分的HPLC指纹图谱的鉴定方法及含量测定方法，色谱条件与系统适用性试验采用Kromasil C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），柱温为25℃，检测波长为254nm，体积流量为0.85mL·min‑1,进样量为10μL，甲醇‑0.1%甲酸为流动相，梯度洗脱；供试品溶液的制备：乙醇加热回流，减压回收乙醇并浓缩成清膏，加4倍量热水作为上样液，加于聚酰胺树脂柱冲洗除杂，得供试品溶液，密吸取供试品溶液10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得，得到三棱总多酚指纹图谱。

主权项

1.一种三棱多酚类成分的HPLC指纹图谱的鉴定方法，其特征是采用以下方法色谱条件与系统适用性试验：4.6mm×250mm，5μm Kromasil C18色谱柱，柱温为25℃，检测波长为254nm，体积流量为0.85mL·min‑1,进样量为10μL，甲醇‑0.1%甲酸为流动相，梯度洗脱：0～60min，甲醇5%～100%，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于4000；供试品溶液的制备：取三棱粉末过四号筛，约10g，精密称定，置250ml具塞锥形瓶中，加入80%乙醇100mL，加热回流60min，冷却，过滤，取续滤液50ml，减压回收乙醇并浓缩成60℃下相对密度1.15的清膏，清膏加4倍量热水搅拌使溶解，静置放冷，作为上样液，取上样液加于30g，1.4cm×10cm聚酰胺树脂柱上，以0.5mL·min^‑1体积流量通过树脂床后，4倍量去离子水冲洗除杂，接着4倍量70%乙醇洗脱，收集流出液，低温浓缩干燥，加甲醇溶解定容至5ml，过滤，即得供试品溶液；测定法：精密吸取供试品溶液10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；得到三棱总多酚指纹图谱，共到10个共有峰，经HPLC‑DAD‑MS分析和对照品比对，其中5个色谱峰分别对应对羟基苯甲酸峰、咖啡酸峰、香兰素峰、对香豆酸峰、阿魏酸峰，洗脱时间分别为22.5min、24.7min、26.3min、29.1min、30.5min。