[发明专利]脂蛋白a的酶联免疫试剂盒及其制备方法

摘要

本发明属于医疗检测领域，具体涉及一种脂蛋白a的酶联免疫检测试剂盒，其由以下成分组成(1)包被有抗脂蛋白a抗体的酶标板；(2)脂蛋白a系列标准品；(3)酶标记抗体溶液；(4)稀释液；(5)洗涤液；(6)底物液；(7)显色液；(8)终止液。所述酶标记抗体溶液为含5mg/L的HRP标记的抗脂蛋白a抗体、0.5mg/L的甘油单蓖麻油酸酯和0.5mg/L的BSA的50mmol/L PBS缓冲液，pH值为8.0。

主权项

一种脂蛋白a的酶联免疫检测试剂盒，其由以下成分组成：（1）包被有抗脂蛋白a抗体的酶标板；（2）脂蛋白a系列标准品；（3）酶标记抗体溶液；（4）稀释液；（5）洗涤液；（6）底物液；（7）显色液；（8）终止液；所述酶标记抗体溶液为含5 mg/L的HRP标记的抗脂蛋白a抗体、0.5 mg/L的甘油单蓖麻油酸酯和0.5 mg/L的BSA的50 mmol/L PBS缓冲液，pH值为8.0；所述底物液为pH值为7.4的磷酸‑柠檬酸缓冲液配制的5％过氧化氢溶液，并且溶液中含0.1 mg/L的焦磷酸二氢钠；所述的酶联免疫检测试剂盒的制备方法，具体步骤如下：（1）包被有抗脂蛋白a抗体的酶标板的制备：a、抗体稀释:用pH为8.0的50 mM的Tris‑HCl缓冲溶液将抗脂蛋白a单克隆抗体稀释到10 μg/ml，得包被液；b、包被:取微孔板，用洗涤液洗涤3次，加入上述含抗脂蛋白a单克隆抗体的包被液，每孔100 μL/孔，4℃孵育12小时；c、封闭:倾去包被液，置于吸水纸上轻拍几次，去除残液，加入含重量百分比为0.1%的甘油单蓖麻油酸酯、0.5%的BSA和1%蔗糖的浓度为50 mmol/L的Tris‑HCl封闭液，其pH为8.0，300 μl/孔，室温，1小时；d、真空干燥，密封，即得包被有抗脂蛋白a抗体的酶标板；（2）酶标记抗体溶液制备：a、将10 mg HRP溶于1 mL蒸馏水中并加入新鲜配制的0.06 mol/L NaIO4 1 mL,混匀于4℃放置30分钟；b、加入0.16 mol/L乙二醇水溶液1 mL，室温放置30分钟；c、加入含5 mg抗脂蛋白a抗体的水溶液2 mL，然后于4℃下，对0.05 mol/L pH 9.6的碳酸缓冲液透析过夜；d、吸出透析袋内溶液，加入0.5 mL NaBH4，4℃下放置2小时；e、滴加等体积饱和（NH4）2SO4溶液，4℃下放置30分钟；f、上述溶液2500 rpm离心10分钟，去除上清液，沉淀用少许0.2 mol/L pH 7.4的PBS溶解，并于4℃下对此缓冲液透析过夜；g、吸出透析袋内溶液，离心除去不溶物，上清液过葡聚糖层析柱，用0.2 mol/L pH7.4的PBS洗脱，收集洗脱液，即为纯化的酶标记抗体；h、将收集的酶标记抗体除菌过滤，配制成酶标记抗体溶液，具体为含5 mg/L的HRP标记的抗脂蛋白a抗体、0.5 mg/L的甘油单蓖麻油酸酯和0.5 mg/L的BSA的50 mmol/L PBS缓冲液，pH值为8.0；（3）标准品、稀释液、洗涤液、底物液、显色液和终止液，按照本领域常规的溶液配制方法制备。