[发明专利]EDF重组蛋白的表达方法在审
| 申请号： | 201610994089.7 | 申请日： | 2016-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN106520811A | 公开（公告）日： | 2017-03-22 |
| 发明（设计）人： | 杨仙玉;宋源普;刘怡君;贾宇坤;蒋桂瑾 | 申请（专利权）人： | 浙江农林大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/475 |
| 代理公司： | 绍兴市越兴专利事务所(普通合伙)33220 | 代理人： | 蒋卫东 |
| 地址： | 311300 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种EDF重组蛋白的表达方法，属于获得肽的基因工程方法技术领域。对中华大蟾蜍EDF‑1的ORF进行密码子优化和化学合成，并连接到原核表达载体，获得重组质粒；将其转化至大肠杆菌感受态细胞中，涂布于含卡那霉素的LB琼脂培养基上倒置培养；次日，取一单菌落接种于LB培养液恒温振荡培养；将培养的菌液接种于新鲜LB培养液，恒温震荡培养，向其中加入IPTG，培养并进行重组蛋白的诱导表达。将发明应用于EDF‑1的表达和纯化、抗血清制备等，具有表达量大、纯度高等优点。 | ||
| 搜索关键词： | edf 重组 蛋白 表达 方法 | ||
【主权项】：
EDF重组蛋白的表达方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）中华大蟾蜍EDF‑1 ORF密码子优化及其原核表达重组质粒的构建：对中华大蟾蜍EDF‑1的ORF进行密码子优化和化学合成，并连接到原核表达载体pET‑28b (+)，获得重组质粒pET‑28b‑EDF‑Bufo；（2）重组蛋白的诱导表达：①将重组质粒pET‑28b‑EDF‑Bufo转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中，涂布于含卡那霉素的LB琼脂培养基上，37℃倒置培养12‑15h；②次日，取一单菌落接种于l mL LB培养液，37℃恒温振荡培养12～15h；③将过夜培养的菌液按l％的体积接种于新鲜的LB培养液，在37℃下恒温震荡培养至OD值介于0.7‑1.0时，向其中加入IPTG，培养并进行重组蛋白的诱导表达。
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