[发明专利]一种基于纸芯片免疫反应距离定性半定量检测抗原的方法

摘要

本发明公开了一种基于纸芯片免疫反应距离定性半定量检测抗原的方法，该方法根据竞争免疫反应完全后，剩余辣根过氧化物酶标记的抗体在Whatman滤纸条上与TMB反应，导致毛细作用力不同而引起的迁移距离不同，建立了基于纸芯片免疫反应距离定性半定量检测抗原的方法。本发明只需用尺子测量不同浓度分析物质产生的距离，即可对物质性质做出判断，其操作简单、成本低廉、绿色环保，无需昂贵的检测仪器、复杂步骤以及专业的操作人员，实现了癌胚抗原等的快速、简单、便捷的分析。

主权项

一种基于纸芯片免疫反应距离定性半定量检测抗原的方法，其特征在于它由下述步骤组成：(1)利用画图软件设计出纸芯片模型，然后利用刻字机的切割刀按照纸芯片模型在Whatman滤纸上切割出纸芯片；(2)将纸芯片经氧等离子体处理，使其表面生成用于固定抗体的醛基；(3)将捕获抗体溶液滴加到纸芯片的检测区，室温孵育30分钟后，用pH＝7.4的PBS缓冲液洗涤，除去未反应的捕获抗体；然后在检测区滴加牛血清蛋白溶液，室温反应15分钟后，用pH＝7.4的PBS缓冲液洗涤，除去未反应的牛血清蛋白；再将抗原溶液滴加到检测区，室温孵育15分钟后，用pH＝7.4的PBS缓冲液洗涤，除去未反应的抗原；最后在检测区滴加辣根过氧化物酶标记的抗体溶液，室温孵育15分钟，形成抗体‑抗原‑酶标抗体复合物；(4)将步骤(3)形成抗体‑抗原‑酶标抗体复合物的检测区剪下固定在长60～80mm、宽2～3mm的Whatman滤纸条一端，用pH＝7.4的PBS缓冲液冲洗后，在检测区加入蓝色沉淀型TMB显色液，反应2～3分钟后，测量剩余辣根过氧化物酶标记的抗体与TMB反应后在Whatman滤纸条上的迁移距离；(5)按照上述步骤(3)～(4)测量实际血清样品，根据剩余辣根过氧化物酶标记的抗体与TMB反应后在Whatman滤纸条上对应的迁移距离，即可实现实际血清样品中抗原的定性及半定量检测。