[发明专利]一种基于磁核-金卫星组装体的PSA检测方法

摘要

本发明公开一种基于磁核‑金卫星组装体的PSA检测方法，属于生物检测领域。该方法是：将修饰有PSA适配体PSA aptamer的磁性纳米颗粒，和修饰有与适配体部分互补的序列PSA CS的金纳米颗粒，组装形成核‑卫星组装体；当存在待测物PSA时，该组装体的结构改变引起体系中上清液的拉曼信号的变化，基于此，可实现对PSA含量的检测。本发明提供了一种基于捕获探针‑拉曼信号颗粒的核‑卫星组装体以实现对PSA超灵敏检测的表面增强拉曼光谱方法，同时结合了磁性捕获探针的磁性富集作用，通过检测上清液而得到拉曼信号，具有灵敏度高，特异、选择性高，检测限低，操作简便，方便快捷的优点，有着非常好的应用前景。

主权项

1.一种基于磁核‑金卫星组装体的PSA检测方法，其特征在于包括如下步骤：首先，将修饰有PSA适配体PSA aptamer的磁性纳米颗粒，和修饰有与适配体部分互补的序列PSA CS的金纳米颗粒，组装形成核‑卫星组装体；当存在待测物PSA时，该组装体的结构改变引起体系中上清液的拉曼信号的变化，基于此实现对PSA含量的检测；所述的PSA适配体序列为5'‑NH2‑(T)10‑ATTAAAGCTCGCCATCAAATAGCTGC‑3'；所述的适配体部分互补的序列为5'‑SH‑(T)10‑GCAGCTATTT‑3'；具体包括如下步骤：(1)采用活化剂活化表面修饰有羧基的磁性微粒，随后加入PSA适配体制备成修饰有PSA适配体PSA aptamer的磁性纳米颗粒，即捕获探针；(2)先将拉曼信号分子结合到金纳米颗粒表面，再将与步骤(1)中适配体部分互补的序列PSA CS修饰到该颗粒表面，制备成拉曼信号颗粒；(3)将步骤(1)中的捕获探针和步骤(2)中的拉曼信号颗粒混合，利用捕获探针上适配体与拉曼信号颗粒上互补序列的杂交，形成捕获探针‑拉曼信号颗粒的核‑卫星组装体；(4)用Tris‑HCl缓冲溶液配制PSA溶液，并稀释成一组具有浓度梯度的标准样品液；(5)取相同体积的步骤(3)中核‑卫星组装体溶液，分别加入不同浓度的目标物PSA，室温孵育，由于PSA会竞争性的与PSA aptamer反应，随着PSA浓度的增加，核‑卫星组装体会有不同程度的解散，上清液中游离的拉曼信号颗粒浓度会发生相应的变化，通过磁分离作用分离底物，进而从上清液中得到不同的拉曼信号强度；(6)根据PSA浓度与拉曼信号强度的关系建立两者之间的标准曲线，从而应用拉曼信号强度对PSA进行检测。