[发明专利]一种用斑马鱼评价心肌损伤诱导剂毒性与治疗剂功效的方法

摘要

本发明建立了一种斑马鱼心肌损伤模型，并提供了一种利用该模型评价心肌损伤诱导剂与治疗剂功效的方法。本发明提供了一种全新的药物评价模型与评价方法，具有可靠、快速、高效、低廉、高性价比等优点，可用于评价已公开药物的功效，还可用于筛选具有全新化合物结构的未公开药物，应用广泛，意义重大。

主权项

1.一种用斑马鱼评价心肌损伤诱导剂毒性的方法，包括如下步骤：(1)斑马鱼发育阶段的确定取野生型AB品系斑马鱼亲本交配、孵化，选择不同发育阶段的斑马鱼分别移入对应的微孔板中；根据不同的发育阶段将对应的微孔板均设为2个实验组：1个为药物处理组，该组中对斑马鱼进行单浓度给药处理，1个为正常对照组，该组中对斑马鱼不进行任何处理；然后，各组均加入相同体积的养鱼用水，在相同温度下恒温培养；当药物处理斑马鱼至实验终点后，将2个实验组的斑马鱼置于心跳血流分析系统，分析斑马鱼心输出量和血流速度，判断并确定斑马鱼的最佳发育阶段；所述不同发育阶段的斑马鱼为受精后2天(2dpf)、受精后3天(3dpf)或受精后4天(4dpf)的斑马鱼；所述最佳发育阶段的斑马鱼为受精后3天(3dpf)的斑马鱼；(2)诱导剂处理将步骤(1)确定的3dpf的斑马鱼移入微孔板中，设置正常对照组和不同给药浓度的诱导剂处理组：正常对照组中对斑马鱼不进行任何处理，诱导剂处理组中对斑马鱼按不同给药浓度的诱导剂处理；然后，各组均加入相同体积的养鱼用水，在相同温度下恒温培养；(3)通过心输出量减少率和血流速度减少率来评价诱导剂毒性当步骤(2)的诱导剂处理斑马鱼至实验终点后，将实验组的斑马鱼置于心跳血流分析系统，统计、分析斑马鱼心输出量和血流速度，计算诱导剂处理组的心输出量减少率和血流速度减少率，与正常对照组比较、评价诱导剂对心肌损伤的毒性程度；计算公式如下：(4)通过心脏损伤诱导率来评价诱导剂毒性当步骤(2)的诱导剂处理斑马鱼至实验终点后，移除微孔板中的液体，各组中均加入浓度为3μg/mL的吖啶橙染色液，在相同温度下恒温培养后，清洗斑马鱼，用立体荧光显微镜对斑马鱼心脏位置拍照并保存；统计、分析斑马鱼心脏部位的损伤细胞荧光强度，计算诱导剂处理组的心脏损伤诱导率，与正常对照组比较、评价诱导剂对心肌损伤的毒性程度；计算公式如下：当诱导剂为异丙肾上腺素时，步骤(2)中各诱导剂处理组的诱导剂给药浓度为20～50mg/ml。