[发明专利]一种促进间充质干细胞软骨组织分化的方法

摘要

本发明公开了一种促进间充质干细胞软骨组织分化的方法，包括以下步骤：分离人间充质干细胞；然后在间充质干细胞中利用慢病毒稳定过表达NR2F2基因以及小RNA干扰技术下调NR2F2基因表达；间充质干细胞NR2F2基因过表达以及下调表达后3D细胞微球的培养；将人间充质干细胞、聚乙烯乙二醇二甲基丙烯酸酯、丙烯酸酯肽和2959光引发剂以及PBS混合制备生物墨水；使用生物打印机在生物打印纸上打印过表达NR2F2基因的3D水凝胶软骨组织；在软骨形成培养基及小鼠皮下培养3D水凝胶软骨组织21天以形成关节软骨组织。本发明操作简便、可重复性强，能够有效促进间充质干细胞软骨组织分化，能够为软骨组织工程的科学研究以及软骨损伤的临床治疗提供有益的参考。

主权项

1.一种促进间充质干细胞软骨组织分化的方法，其特征在于：包括以下步骤：a）分离人间充质干细胞，b）在间充质干细胞中利用慢病毒稳定过表达NR2F2基因以及小RNA干扰技术下调NR2F2基因表达，c）间充质干细胞NR2F2基因过表达以及下调表达后3D细胞微球的培养，d）将人间充质干细胞、聚乙烯乙二醇二甲基丙烯酸酯、丙烯酰基化多肽和2959光引发剂以及PBS混合制备生物墨水，e）使用生物打印机在生物打印纸上打印过表达NR2F2基因的3D水凝胶软骨组织，f）在软骨形成培养基及小鼠皮下培养3D水凝胶软骨组织21天以形成关节软骨组织；步骤b）中使用转染试剂将慢病毒pCDH‑EF1‑Nr2f2‑T2A‑GFP 或pCDH‑EF1‑T2A‑GFP序列与pCMV‑VSVG 及 pCMV‑dvpr共同转入293FT细胞中扩增培养，2‑3天后离心收集上清液，慢病毒使用浓度为10MOI同时给予2mg/mL嘌呤霉素，其中NR2F2基因过表达效率达到初始含量的40倍以上；步骤b）小RNA干扰人骨髓间充质干细胞NR2F2基因的表达中使用的是脂质体转染试剂及OMEM，RNA使用终浓度调整为10nM，其中作用时间为72小时，转染效率达到80‑90%。