[发明专利]氨基化石墨烯量子点/BSA复合探针检测胰蛋白酶的方法

摘要

本发明提供了一种氨基化石墨烯量子点/BSA复合探针检测胰蛋白酶的方法，包括如下步骤：步骤1、氨基化石墨烯量子点的制备；步骤2、氨基化石墨烯量子点/牛血清蛋白复合探针的制备；步骤3、荧光测试；步骤4、胰蛋白酶的检测。本发明制备的氨基化石墨烯量子点/牛血清蛋白复合探针具有制备方法简单，荧光稳定性强的特点。对胰蛋白酶的检测具有操作简便、快速及高灵敏性，在疾病的诊断与治疗方面具有广阔的应用前景。这为快速高效检测胰腺病人的胰蛋白酶含量提供了一种新方法。

主权项

1.一种氨基化石墨烯量子点/BSA复合探针检测胰蛋白酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、氨基化石墨烯量子点的制备：首先制备氧化石墨烯GO，配制1.0mg/mL的GO溶液，量取5mL配制好的GO溶液、3～9mL质量分数28％的氨水和5mL二次蒸馏水混合均匀，继续搅拌30min后迅速将其转移至聚四氟乙烯高压反应釜中进行恒温热反应，冷却至室温，使用0.22um的聚四氟乙烯滤膜抽滤，得滤液；将滤液在100℃下加热1h除去多余的氨；将所得溶液使用10kDa的渗析袋渗析24h，真空冷冻干燥后制得氨基化石墨烯量子点；步骤2、氨基化石墨烯量子点/牛血清蛋白复合探针的制备：配制pH＝8的磷酸缓冲溶液和0.1mg/mL的氨基化石墨烯量子点溶液待用；在剧烈搅拌的条件下分别量取氨基化石墨烯量子点溶液4mL，磷酸缓冲溶液4mL和BSA溶液2mL，混合，其中BSA溶液的浓度为1mg/mL，在混合好的溶液置于37℃下恒温孵化，即可得到氨基化石墨烯量子点/牛血清蛋白复合探针；将复合探针溶液置于4℃下保存待用；步骤3、荧光测试：将步骤2制备的0.1mg/mL的氨基化石墨烯量子点溶液进行荧光光谱测试，得到的最佳激发波长为Ex＝340nm，最佳发射波长为Em＝431nm；在相同的条件下测试步骤2得到的氨基化石墨烯量子点/牛血清蛋白复合探针，当激发波长为Ex＝340nm，复合探针的发射波长为Em＝445nm；相比较氨基化石墨烯量子点的荧光发射波长，复合探针的荧光发射波长发生了红移，并且复合探针的荧光强度增强；步骤4、胰蛋白酶的检测：量取制备好的氨基化石墨烯量子点/牛血清蛋白复合探针2mL，加入2mL的pH＝8的磷酸缓冲溶液混合均匀，再加入不同浓度的胰蛋白酶溶液1mL，混合均匀，在37℃下孵化，检测其在激发波长为Ex＝340nm时的发射波长和荧光强度。