[发明专利]一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体及应用

摘要

本发明公开了一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体及应用，本发明将狭义伯氏疏螺旋体接种培养基扩大培养后获得菌体抗原，将菌体抗原免疫大白兔，免疫程序结束后收集兔血清，获得所述多克隆抗体。本发明制备的狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体特异性好，效价高，能有效检出莱姆病螺旋体，有很强的应用前景。

主权项

一种狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体，其特征在于，通过以下方法制备得到：(1)抗原制备：将狭义伯氏疏螺旋体菌株接种至BSK‑II培养基，在33‑37℃、体积浓度为5％的恒温培养箱培养至菌体浓度1‑2×108cfu/ml，获得培养液；然后将培养液在4℃、3200rcf离心25min，收集沉淀并用NaCl水溶液重悬清洗两次；接着用含甲醛的NaCl水溶液重悬菌体后于60℃水浴中温育约1h，并不时摇动；4℃、3200rcf离心约25min，收集菌体沉淀，再用NaCl水溶液洗涤三次，获得狭义伯氏疏螺旋体菌体抗原；所述NaCl水溶液中，NaCl的质量浓度为0.9％；所述含甲醛的NaCl水溶液中，甲醛的质量浓度为0.3％‑0.5％。(2)动物免疫：获得的狭义伯氏疏螺旋体菌体抗原用质量浓度为0.9％的NaCl水溶液重悬，免疫注射用菌体抗原悬浮液浓度5×108‑10×108cfu/ml；首次免疫，取500μl悬浮液与等量弗氏完全佐剂乳化混合，于新西兰大白兔背部多点皮内注射；第二次免疫、第三次免疫、第四次免疫均取500μl悬浮液与等量弗氏不完全佐剂乳化混合，于新西兰大白兔背部多点皮内注射；首次免疫、第二次免疫、第三次免疫、第四次免疫注射时间间隔分别为21天、14天、7天。(3)血清获取：第四次免疫完成后7天，用质量浓度为5％‑15％的水合氯醛的水溶液，按照5‑10ml/kg的剂量麻醉新西兰大白兔，用采血针进行颈动脉采集全血；全血室温凝固后，4℃放置过夜，3000rcf离心10min，吸取上清，得狭义伯氏疏螺旋体多克隆抗体，‑80℃保存备用。