[发明专利]浮萍原生质体制备方法有效
| 申请号： | 201610908853.4 | 申请日： | 2016-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN107964530B | 公开（公告）日： | 2019-08-27 |
| 发明（设计）人： | 杨琳;韩玉洁;吴迪;王苏桐;魏莹;李红雅;张小兰;刘文鑫;陆美伊;王家乐 | 申请（专利权）人： | 天津师范大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 天津创智天诚知识产权代理事务所(普通合伙) 12214 | 代理人： | 李蕊;王秀奎 |
| 地址： | 300387 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种浮萍原生质体制备方法，按照下述步骤进行：调整Datko培养基的PH至5～6，进行高压灭菌；采集浮萍，将浮萍培养于步骤1所述的Datko培养基上，每周继代1～2次，得到浮萍植株；夹取步骤2中所述浮萍植株，用A液清洗后，将所述浮萍植株放入离心管中，加入组织固定液固定所述浮萍植株至少15min；在酶解温度为23～27℃的条件下，用组织酶解液在黑暗条件下酶解步骤3所得的浮萍植株25～30min，每间隔10～15min吹打混匀一次，得到悬浮的浮萍原生质体，本发明的浮萍原生质体制备方法取材少，耗时短，操作简单方便，获得的浮萍原生质体浓度高，数据分析具有代表性。 | ||
| 搜索关键词： | 浮萍植株 浮萍 原生质体制 浮萍原生质体 培养基 高压灭菌 黑暗条件 酶解步骤 数据分析 组织固定 离心管 酶解液 吹打 放入 混匀 继代 夹取 酶解 耗时 清洗 取材 悬浮 采集 | ||
【主权项】：
1.一种浮萍原生质体制备方法，其特征在于，按照下述步骤进行：步骤1，调整Datko培养基的PH至5～6，于95～105kPa、120～125℃下进行高压灭菌；所述Datko培养基由水和下述浓度的化合物组成：![]()
步骤2，采集浮萍，将浮萍培养于步骤1所述的Datko培养基上，每周继代1～2次，得到浮萍植株；其中，培养条件为：温度18～25℃，光周期16～18小时/天，光强95～97μmol m‑2s‑1；步骤3，夹取步骤2中所述浮萍植株，用A液清洗后，将所述浮萍植株放入离心管中，加入组织固定液固定所述浮萍植株至少15min；其中，所述组织固定液由去离子水和下述浓度的乙醇水溶液和冰醋酸组成：乙醇水溶液 85～95g/l冰醋酸 95～100g/l，其中，在所述乙醇水溶液中乙醇的体积浓度为80～90％；所述A液由去离子水和下述浓度的化合物组成：Nacl 8～9g/lK2HPO4·3H2O 11～12g/lKH2PO4 6～7g/l步骤4，在酶解温度为23～27℃的条件下，用组织酶解液在黑暗条件下酶解步骤3所得的浮萍植株25～30min，每间隔10～15min吹打混匀一次，得到悬浮的浮萍原生质体；其中，所述组织酶解液由去离子水和下述浓度的物质组成：![]()
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