[发明专利]木瓜药材中天然抗氧化剂在线发现及综合抗氧化活性评价方法

摘要

本发明公开了木瓜药材中天然抗氧化剂在线发现及综合抗氧化活性评价方法，首先测定不同批次木瓜提取液的抗氧化活性；之后采用HPLC‑ESI‑TOF/MS测量并确定木瓜中含有的化学成分；然后再采用HPLC‑DPPH在线筛选方法筛选出木瓜中具有抗氧化活性的化学成分，并测定部分活性成分的IC₅₀值；通过对多批次木瓜样品的HPLC分析建立其抗氧化活性指纹图谱，采用指纹图谱相似度分析用于不同品种木瓜的抗氧化活性评价；再选取多个抗氧化活性成分进行含量测定；即：通过木瓜提取液的抗氧化能力初步鉴定木瓜抗氧化活性品质，通过抗氧化性指纹图谱相似度分析初步鉴定不同品种木瓜之间的品质差异，通过多个抗氧化活性成分的含量分析，从而对木瓜药材的抗氧化性进行综合评价。

主权项

1.木瓜药材中天然抗氧化剂在线发现及综合抗氧化活性评价方法，其特征是，步骤为：（1）制备木瓜提取液；（2）采用基于酶标仪的体外清除DPPH活性测定方法对木瓜提取液的抗氧化活性进行测定；（3）优化HPLC‑ESI‑TOF/MS的色谱条件，并检测木瓜提取液中含有的化学成分；（4）采用HPLC‑DPPH在线筛选方法对木瓜提取液进行抗氧化成分快速筛选，并测定部分抗氧化活性化学成分的IC50值；（5）通过对多批次木瓜样品的HPLC分析，以筛选出的具有抗氧化活性的色谱峰作为共有峰建立其抗氧化活性指纹图谱，结合相似度分析对不同品种和批次的木瓜进行抗氧化活性成分评价；（6）建立木瓜中多个抗氧化活性成分HPLC含量测定方法，并对多批次样品进行含量测定；（7）结合步骤（2）、（4）‑（6）的结果对木瓜进行综合抗氧化活性评价；HPLC的色谱条件为：流动A相:水，其中，水中含有0.8% 甲酸及10 mM 甲酸铵，流动B相:乙腈，其中，乙腈中含有0.3%甲酸；梯度洗脱：T(min): 0‑25‑30‑40‑50‑65‑80‑95‑105‑110；B%: 5‑9‑9‑11‑12‑14‑15‑18‑20‑100，检测波长在0‑67 min时为280 nm，在67‑110 min时为345 nm；步骤（1）的步骤为：将木瓜加入甲醇中，水浴后加入水匀质，将均质后的匀质体静置去上清液过滤后即得木瓜提取液。