[发明专利]牛乳寡糖测定方法

摘要

本发明公开了一种牛乳寡糖测定方法，包括如下步骤：步骤一、提取牛乳寡糖粗品；步骤二、首先利用Sep‑Pak C18柱将牛乳寡糖粗品进行纯化，得到纯化的牛乳寡糖液体，后利用石墨化柱体将纯化的牛乳寡糖体进行富集，得到富集的牛乳寡糖液体，最后将富集的牛乳寡糖液体干燥，得到牛乳寡糖；步骤三、采用2‑氨基吖啶酮衍生化试剂对步骤二中得到的牛乳寡糖进行衍生化处理；以及步骤四、采用高效液相串联离子阱飞行时间质谱对衍生化的牛乳寡糖进行测定。本发明试验方法简单可行、结果稳定、可用于牛乳寡糖的分离和测定。

主权项

1.一种牛乳寡糖测定方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、提取牛乳寡糖粗品；步骤二、首先利用Sep‑Pak C18柱将牛乳寡糖粗品进行纯化，得到纯化的牛乳寡糖液体，之后利用石墨化柱体将纯化的牛乳寡糖体进行富集，得到富集的牛乳寡糖液体，最后将富集的牛乳寡糖液体干燥，得到牛乳寡糖；步骤三、采用2‑氨基吖啶酮衍生化试剂对步骤二中得到的牛乳寡糖进行衍生化处理；以及步骤四、采用高效液相串联离子阱飞行时间质谱对衍生化的牛乳寡糖进行测定；以体积份数计，所述步骤二中，利用Sep‑Pak C18柱将牛乳寡糖粗品进行纯化的具体方法包括：2.1）首先用50份甲醇平衡Sep‑Pak C18柱，然后用100份体积比浓度0.1%的TFA润洗Sep‑Pak C18柱子；以及2.2）将所述牛乳寡糖粗品溶于2份体积比浓度0.1%的TFA中，然后上样到Sep‑Pak C18柱中，收集过柱液体，将收集的液体再次加入Sep‑Pak C18中，再次收集过柱液体，重复2次，最后用30份体积比浓度0.1% 的TFA 冲洗Sep‑Pak C18，也收集过柱液体，合并过柱液体得到所述纯化的牛乳寡糖液体；以体积份数计，所述步骤二中，利用石墨化柱体将纯化的牛乳寡糖液体进行富集的具体方法包括：2.3）首先用3倍柱体积的含有体积比浓度0.10% TFA的80%的乙腈溶液和纯水依次通过石墨化柱体，然后将所述纯化的牛乳寡糖液体上样于所述石墨化柱体中，控制流速0.5~1ml/min，收集过柱液体，将过柱液体重复通过所述石墨化柱体若干次，所述乙腈溶液的浓度也为体积比浓度；2.4）用3倍柱体积的纯水通过所述石墨化柱体；2.5）分别采用5份含有体积比浓度0.10%TFA的10%的乙腈溶液、含有0.10 %TFA的体积比浓度20%的乙腈溶液和含有0.10 %TFA的体积比浓度40%的乙腈溶液对所述石墨化柱体分步洗脱，收集洗脱液，得到所述富集的牛乳寡糖液体，所述乙腈溶液的浓度也为体积比浓度。