[发明专利]一种用于提取柑橘果肉有色体中的质体小球的方法

摘要

本发明涉及一种用于提取柑橘果肉有色体中的质体小球的方法，其包括以下步骤：S1：从柑橘果肉中提取有色体；S2：超声破碎所述有色体，得到有色体裂解液；S3：使用含有碘海醇浓度梯度的系列溶液对所述有色体裂解液于150000g下梯度离心，分层后的上层液体即为质体小球。通过使用本发明的方法可有效地从柑橘果肉中提取有色体质体小球，分层效果明显，所得到的质体小球的纯度高，提纯效果好，并且保持了质体小球中的蛋白质在种类和结构上的完整性。

主权项

1.一种用于提取柑橘果肉有色体中的质体小球的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：从1600克柑橘果肉中提取有色体，并将所述有色体于6000g下离心7min得到沉淀；S2：超声破碎所述有色体，得到有色体裂解液，包括以下步骤：S2.1：用4ml缓冲液B重悬所述沉淀，并向其中添加100μl蛋白酶抑制剂和100μl磷酸酶抑制剂，得到有色体混合液；S2.2：将所述有色体混合液用液氮速冻，并于‑80℃下放置1.5h，然后在冰上融化；S2.3：冻融处理的所述有色体混合液在冰浴状态下，用超声破碎仪破碎，得到有色体裂解液；S3：使用含有碘海醇浓度梯度的系列溶液对所述有色体裂解液于150000g下梯度离心，分层后的上层液体即为质体小球，包括以下步骤：S3.1：取13.2ml离心管，用无菌的牛血清均匀涂抹于所述离心管内壁上；S3.2：用缓冲液A稀释缓冲液B，得到碘海醇含量分别为质量体积比20％、10％、7.5％和5％的碘海醇溶液，向所述离心管中依次加入4ml所述有色体裂解液、2ml20％的碘海醇溶液、1ml10％的碘海醇溶液、2ml7.5％的碘海醇溶液和3ml5％的碘海醇溶液；S3.3：将加有所述有色体裂解液和碘海醇密度梯度溶液的离心管于4℃150000g下离心15h，液体分层后，最上层液体即为质体小球；其中，所述缓冲液A的配方如下：所述缓冲液B的配方如下：