[发明专利]一种用于提取柑橘果肉有色体中的质体小球的方法

说明书

本发明涉及一种用于提取柑橘果肉有色体中的质体小球的方法，其包括以下步骤：S1：从柑橘果肉中提取有色体；S2：超声破碎所述有色体，得到有色体裂解液；S3：使用含有碘海醇浓度梯度的系列溶液对所述有色体裂解液于150000g下梯度离心，分层后的上层液体即为质体小球。通过使用本发明的方法可有效地从柑橘果肉中提取有色体质体小球，分层效果明显，所得到的质体小球的纯度高，提纯效果好，并且保持了质体小球中的蛋白质在种类和结构上的完整性。

技术领域

本发明涉及植物生化领域，更特别地，涉及一种用于提取柑橘果肉有色体中的质体小球的方法。

背景技术

质体是植物中特有的细胞器，包括叶绿体、白色体和有色体。质体小球是广泛存在于质体中的脂蛋白颗粒(如图4的柑橘果肉电镜照片，黑色区域为质体小球)。在叶绿体中，质体小球在结构上与类囊体外膜相连，类囊体以起泡的形式产生质体小球。质体小球作为类囊体上的微域，在参与类囊体合成、修复、降解以及新陈代谢上具有重要作用。在柑橘果肉有色体(质体的一种形式)中也存在大量质体小球，然而它的功能并不清楚。质体小球的主要由单层膜、由该膜包裹的脂类物质和镶嵌在该膜上的约30种蛋白质组成，其中脂类物质包括质体醌、叶绿素醌、生育酚、三酰甘油、类胡萝卜素等。镶嵌于膜上的蛋白质可分成三大类：(1)丰度最高的原纤维蛋白(FBNs)；(2)参与脂类代谢物的酶，例如，ABC1K激酶以及部分参与类胡萝卜素和维生素E代谢的酶类；(3)其他蛋白质。

质体小球的膜上镶嵌的蛋白质与其功能有关，改变质体小球上蛋白质会引起代谢物的变化。拟南芥中关于叶绿体质体小球的蛋白组成及部分结构基因的功能已得到了初步验证，但是对于非绿色组织中的质体小球的起源、发育、蛋白质组成及调控机制并不清楚。为了研究质体小球在柑橘果肉等非绿色组织中的功能，首先需要分离得到质体小球。中国专利201010260376.8公开了一种提纯柑橘果肉有色体的方法，然而尚没有专门针对柑橘果肉有色体的质体小球的提取方法。

超速密度梯度离心是最常用的质体小球提纯方法。理想的梯液要具备优良的化学稳定性、高溶合度、低渗透性、好的溶剂中稳定性以及较低的光吸收性等特性这种材料最好还是廉价的。例如，蔗糖就是一种比较合适的梯度材料。尽管它在高密度(>30％W/N)时粘性系数较大，但综合比较表明它可以广泛应用。但由于蔗糖在各种密度下都具有有较高的渗透性(即使是低密度时也如此)，因此，分离一些渗透性敏感的生物组分时，需要选择其他梯度材料，如由pharmacia公司开发的Ficoll等等。对细胞、亚细胞结构或其他生物大分子的等密度离心分离也各有不同要求。常用于等密度离心梯度材料见表1所示：

表1等密度离心梯度的应用