[发明专利]一种制备血管内皮生长因子试剂的应用方法

摘要

本发明公开了一种制备血管内皮生长因子试剂的应用方法，其特征在于：化学发光板使用前每孔加200µl清洗液，等待30秒后甩尽清洗液，重复2次；VEGF‑C系列标准品溶液，VEGF‑C系列质控品溶液，酶标VEGF‑C抗体溶液各20μl分别加入化学发光板微孔中，再加入样本稀释液80μl，震荡混匀后，甩去化学发光板孔内液体，每孔加200µl清洗液，等待30秒后甩尽清洗液；加入生物素标记抗体，每孔100µl，用封板膜封板；甩去孔内液体，每孔加200µl清洗液，等待30秒后甩尽清洗液，重复此操作5次；每孔加入100µl的链酶亲和素‑HRP，用封板膜封板，甩去孔内液体，每孔加200µl清洗液，等待30秒后甩尽清洗液；每孔分别加入50µl化学发光液A液和50µl化学发光液B液，立刻置于化学发光仪器中读数。

主权项

一种制备血管内皮生长因子试剂的应用方法，其特征在于：试剂包括VEGF‑C系列标准品溶液，VEGF‑C系列质控品溶液，酶标VEGF‑C抗体溶液，酶标抗体稀释液，样本稀释液，链酶亲和素‑HRP，化学发光液A液，化学发光液B液，浓缩洗涤液，包被溶液，封闭溶液；所述VEGF‑C系列标准品溶液：将VEGF‑C纯品用标准品稀释液配制成浓度分别为0、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、400ng/mL、800ng/mL的VEGF‑C标准溶液；所述VEGF‑C系列质控品溶液：将VEGF‑C纯品用标准品稀释液配制成浓度分别为：400±80ng/mL、200±40ng/mL；所述酶标VEGF‑C抗体溶液：用VEGF‑C抗体与生物素偶联制备，将所得VEGF‑C抗体用酶标抗体稀释液稀释成1:4000的工作浓度；所述酶标抗体稀释液：为含有BSA，蔗糖的0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4，磷酸盐缓冲液是每升含有20g BSA，50g蔗糖，16g NaCl，0.4g KCl，0.4g KH₂PO₄，5.8g Na₂HPO₄的水溶液；所述样本稀释液：为0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4，磷酸盐缓冲液是每升含有16g NaCl，0.4g KCl，0.4g KH₂PO₄，5.8g Na₂HPO₄的水溶液；所述化学发光液：化学发光液A液为鲁米诺含量为0.01M、对甲苯酚含量为0.001M，pH＝8.8的三羟甲基氨基甲烷溶液，化学发光液B液为每100mL溶液含柠檬酸2.1g，无水Na₂HPO₄ 2.82g，0.75％的过氧化氢脲0.64mL的水溶液；所述浓缩洗涤液：按体积分数0.05％将吐温‑20添加至pH＝7.4，0.1mol/L磷酸盐缓冲液中；所述包被溶液：1.59g碳酸钠和2.53g碳酸氢钠溶于1L水中，调节pH＝9.5；所述封闭溶液：10g BSA溶于1L洗涤溶液中，再加入重量比为5‰的NaN₃。