[发明专利]一种基于MoS2‑PA‑FA检测癌细胞上FR的方法

摘要

本发明公开了一种基于MoS2‑PA‑FA检测癌细胞上FR的方法。该FR检测方法包括以下步骤合成荧光苯炔有机物PA；合成MoS2纳米片；将合成的炔有机物PA和MoS2纳米片用连接剂进行复合，然后在得到的复合物上修饰上叶酸FA，得到复合物MoS2‑PA‑FA；将MoS2‑PA‑FA和癌细胞共同培养一段时间后，检测荧光强度；本发明所述FR检测方法操作简单、选择性好、灵敏度高、可实现实时监测。

主权项

一种基于MoS2‑PA‑FA检测癌细胞上FR的方法，其包括以下步骤：（1）将实验所需要的有机试剂进行蒸馏纯化；（2）将2.76 g 1,4‑二甲氧基苯、20 mL乙酸、2 mL蒸馏水、1 mL浓硫酸、9.22 g高碘酸钠和10.22 g碘混匀，加热到70 ℃，冷凝回流36 h，然后过滤，用二氯甲烷洗涤溶解固体，饱和亚硫酸钠溶液洗至二氯甲烷颜色不变，再用氯化钠洗涤有机相，干燥、过滤、旋蒸、重结晶得到产品2；（3）将1.17 g步骤（2）所得产品2与5 mL甲醇、5 mL四氢呋喃、0.79 g碳酸钾混合，70 ℃ 冷凝回流10 h，旋蒸，二氯甲烷洗涤旋蒸后得到的液体，分液，氯化钠洗涤分液，再用无水硫酸钠干燥洗涤后得分液，过滤、旋蒸、过硅胶柱子，得到产品3；（4）将0.58 g步骤（3）所得产品3与5 mL三乙胺、15 mL四氢呋喃、0.02 g Pd(pph3)2Cl2、0.023 g 碘化亚铜混匀，用恒压漏斗加入0.9 mL三甲基硅基乙炔，加热到75 ℃ 冷凝回流10 h，饱和氯化铵洗涤反应液，无水硫酸钠除水，然后旋蒸除杂，乙醚洗涤旋蒸液，再进行旋蒸，得到产品4；（5）将1.16 g步骤（4）所得产品4与5 mL三乙胺、15 mL四氢呋喃、0.02g Pd(pph3)2Cl2、3.27 g 4‑碘苯甲酸甲酯混匀，70 ℃ 冷凝回流3 h，过夜，用饱和氯化铵溶液洗涤，分液去水，然后用饱和氯化钠洗涤，二氯甲烷洗涤分液，将得到的液体用无水硫酸钠干燥过滤，加入2药匙硅胶粉，旋蒸，得到产品5；（6）将0.1 g步骤（5）所得产品5与8 mL甲醇、15 mL四氢呋喃、1.0 g氢氧化钾混合，75 ℃ 冷凝回流5 h，冷却后向反应液中加入10 mL 10 % 的盐酸、50 mL蒸馏水，三氯甲烷洗涤旋蒸干燥后得到产品6，即荧光苯炔有机物PA，分子式为C26H18O6；（7）合成MoS2纳米片；（8）将合成的苯炔有机物PA和MoS2纳米片用连接剂1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基丁二酰亚胺混合液进行复合，然后在得到的复合物上修饰上叶酸FA，得到复合物MoS2‑PA‑FA；（9）将MoS2‑PA‑FA和癌细胞共同培养一段时间后，检测荧光强度，根据荧光恢复值测得FR的含量。