[发明专利]一种金银花专用微生物菌肥及其制备方法

摘要

本发明公开了一种金银花专用微生物菌肥及其制备方法。该微生物菌肥的原料由季伦类芽孢杆菌菌粉，解淀粉芽孢杆菌菌粉，粪生链霉菌菌粉，美丽链霉菌菌粉，土星孢木霉菌粉，黄腐酸钾，氨基酸原粉，中微量元素；本发明中所使用的这5株菌株都是可从土壤中直接分离得到，都具有根迹促生作用，具有解磷，固氮，解钾作用，可在作物表面、植株内部或土壤中繁殖生长的同时，并定向植物根际分泌某些次生代谢产物，能够提高植物对养分的吸收、刺激植株生长起到肥料的效果；本发明微生物菌肥对人、畜安全，属于环境友好型，本发明制备方法简单、成本低、使用简单。

主权项

一种金银花专用微生物菌肥其特征在于，制备该微生物菌肥的原料按重量份为：季伦类芽孢杆菌菌粉10‑30份，解淀粉芽孢杆菌菌粉20‑40份，粪生链霉菌菌粉20‑40份，美丽链霉菌菌粉10‑30份，土星孢木霉菌粉20‑40份，黄腐酸钾20‑60份，氨基酸原粉10‑30份；中微量元素0.1‑0.2份；其具体制备方法，包括以下步骤：步骤一、季伦类芽孢杆菌菌粉的制备取出季伦类芽孢杆菌保藏管，用无氮固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养72小时，在平板下挑取单个菌落接种至装有无氮固体培养基，在30℃培养箱中培养72小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L季伦类芽孢杆菌种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前8小时通气量为100L/min，8‑24小时后通气量为200L/min ，24小时后通气量为300L/min ，30℃培养32‑48小时，待总菌数含量不低于20亿cfu/ml，即可作为季伦类芽孢杆菌种子液；发酵：将上述制备的季伦类芽孢杆菌种子液以10%‑20%的比例接种至季伦类芽孢杆菌固体培养基上，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5‑10cm，控制发酵温度为30‑40℃，发酵36‑48小时，待芽孢含量不低于50亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到季伦类芽孢杆菌菌粉；其中，所述无氮固体培养基：蔗糖10g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸钙0.1g，碳酸钙5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH7.2；其中，所述季伦类芽孢杆菌种子培养基：糖蜜20g/L，玉米淀粉10 g/L， 花生粕粉30 g/L，硫酸镁0.4 g/L，硫酸锰0.6g/L，磷酸二氢钾0.6 g/L，碳酸钙10 g/L， pH7.0；季伦类芽孢杆菌固体培养基：啤酒糟57%，麸皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%‑60%；各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；步骤二、解淀粉芽孢杆菌菌粉的制备取出解淀粉芽孢杆菌保藏管，用营养肉汁固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至装有营养肉汁固体培养基，在30℃培养箱中培养48小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L解淀粉芽孢杆菌液体种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前12小时通气量为200L/min，12小时后通气量为320L/min，30℃培养16‑24小时，待总菌含量不低于10亿cfu/ml，即可作为解淀粉芽孢杆菌液体种子；发酵：将上述制备的解淀粉芽孢杆菌液体种子加至解淀粉芽孢杆菌固体发酵培养基中，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5‑10cm，控制发酵温度为30‑40℃，发酵36‑48小时，待芽孢含量不低于50亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过40目筛，即得到解淀粉芽孢杆菌菌粉；其中，所述营养肉汁固体培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂20 g，水1000mL，pH7.2；其中，所述解淀粉芽孢杆菌液体种子培养基：葡萄糖8g/L，玉米粉10 g/L， 豆粉10 g/L，硫酸镁0.2 g/L，硫酸锰0.1 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，磷酸氢二钠1.0 g/L，pH7.0；其中，解淀粉芽孢杆菌固体发酵培养基：麸皮60%， 玉米皮35%，棉粕2%，石粉3%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，硫酸锰0.01%，培养基含水量50%‑60%；各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；步骤三，粪生链霉菌菌粉的制备取出粪生链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6‑8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为粪生链霉菌种子液；发酵：将上述制备的粪生链霉菌种子液以3%的接种量接种至灭菌的粪生链霉菌固体发酵培养基上，菌种与粪生链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的粪生链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为3‑6cm，控温28‑32℃，第一天空气湿度保持为60%‑75%，过后空气湿度保持为40%‑50%，发酵3‑4天，检测其孢子含量不低于20亿CFU/g，即可低温风干至水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到粪生链霉菌菌粉；其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0.5克，硫酸镁：0.5克，氯化钠：0.5克，硫酸亚铁：0.01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml ，PH7.2～7.4；其中，所述的粪生链霉菌固体发酵培养基：甘蔗渣80%，豆粕2%，玉米芯粉1%，石粉10%，麸皮7%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%‑60%；各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；步骤四，美丽链霉菌菌粉的制备取出美丽链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6‑8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为美丽链霉菌种子液；发酵：将上述制备的美丽链霉菌种子液以5%的接种量接种至灭菌的美丽链霉菌固体发酵培养基上，菌种与美丽链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的美丽链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5‑8cm，控温28‑32℃，前两天空气湿度保持为60%‑75%，过后空气湿度保持为40%‑50%，发酵4‑6天，检测其孢子含量不低于10亿CFU/g，即可低温风干水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到美丽链霉菌菌粉；其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0.5克，硫酸镁：0.5克，氯化钠：0.5克，硫酸亚铁：0.01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml ，PH7.2～7.4；其中，所述的美丽链霉菌固体发酵培养基：米糠80%，棉粕2%，玉米粉1%，石粉2%，麸皮15%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%‑60%；各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；步骤五，土星孢木霉菌粉的制备土星孢木霉种子液的制备：取出土星孢木霉菌种保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏，30℃培养6天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养4‑6天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为土星孢木霉种子液；发酵：将上述制备的土星孢木霉种子液以2%的接种量接种至灭菌的土星孢木霉固体发酵培养基上，菌种与土星孢木霉固体培养基混合均匀后，将接好种的土星孢木霉固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5‑10cm，控温28‑32℃，湿度保持为60%‑75%，发酵4‑6天，检测其总孢子含量不低于30亿CFU/g，即可低温风干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到土星孢木霉菌粉；其中，所述的PDA固体培养基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，琼脂20g；其中，所述的土星孢木霉固体发酵培养基：甘蔗渣85%，芝麻渣粕2%，玉米芯5%，石粉4%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%‑60%；各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；步骤六，将上面制成的各种菌粉按季伦类芽孢杆菌菌粉10‑30份，解淀粉芽孢杆菌菌粉20‑40份，粪生链霉菌菌粉20‑40份，美丽链霉菌菌粉10‑30份，土星孢木霉菌粉20‑40份，黄腐酸钾20‑60份，氨基酸原粉10‑30份；中微量元素0.1‑0.2份混合，均匀，即为金银花专用微生物菌肥。