[发明专利]一种CHO-Dhfr表达系统细胞株的高通量筛选方法有效
| 申请号： | 201610692407.4 | 申请日： | 2016-08-18 |
| 公开（公告）号： | CN106318970B | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 刘静;杨彬;张彩霞;陈华林;陈莉;孙文正;李文佳 | 申请（专利权）人： | 广东东阳光药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 523808 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及细胞工程领域，具体涉及一种CHO‑Dhfr表达系统细胞株的高通量筛选方法。该方法采用氨甲喋呤三轮加压，选择细胞活力在40％～50％的细胞池，在特定的半固体培养基中进行单克隆化，该方法克隆形成率显著提高，且能够在较短时间内筛选出更多的表达量高且稳定的菌株。 | ||
| 搜索关键词： | 高通量筛选 表达系统 细胞株 半固体培养基 氨甲喋呤 单克隆化 细胞工程 细胞活力 表达量 细胞池 菌株 加压 克隆 筛选 | ||
【主权项】：
1.一种CHO‑Dhfr表达系统细胞株的高通量筛选方法，包含以下步骤：（1）表达构建体的构建，（2）转染至宿主细胞，（3）氨甲喋呤加压筛选获得细胞池，（4）细胞池在半固体培养基上进行单克隆化，（5）利用高通量细胞筛选系统筛选细胞株，（6）细胞株的稳定性评估；其特征在于，步骤（4）所述的细胞池的细胞活力为40%~50%，所述的半固体培养基中含有条件培养基与甲基纤维素，条件培养基占半固体培养基总体积的10%，甲基纤维素在半固体培养基中的含量为0.9~1.5g/L；其中，所述的条件培养基的制备方法为：取已经转染载体的稳定细胞株在添加8mM谷氨酰胺的OptiCHO Medium中进行批培养，细胞培养至密度在0.9×107~1.1×107cells/mL之间且细胞活力>95%时，经过离心分离上清和细胞，取上清过滤后即得；所述载体为pOptiVEC，含有Dhfr基因，不含有其它外源蛋白的基因；所述细胞株为DG44细胞。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于广东东阳光药业有限公司，未经广东东阳光药业有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201610692407.4/，转载请声明来源钻瓜专利网。
