[发明专利]一种基于二代测序技术的工业化基因合成方法在审
| 申请号： | 201610675551.7 | 申请日： | 2016-08-17 |
| 公开（公告）号： | CN107760672A | 公开（公告）日： | 2018-03-06 |
| 发明（设计）人： | 钟云鹏;刁文一;李彦敏;杨平 | 申请（专利权）人： | 苏州泓迅生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司32103 | 代理人： | 汪青,周敏 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市苏州*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基于二代测序技术的工业化基因合成方法，该方法包括如下步骤将待合成的序列拆分成多段小片段，然后用首尾合成引物合成拆分的多段小片段；采用5’端含有20个随机碱基的扩增用上下游引物对合成的小片段进行扩增；将扩增后的所有小片段混合，然后采用二代测序技术进行测序，将测序结果进行对比分析，找到与预期完全一致的序列，从而确定该序列两端的随机序列为所需序列，然后根据所需序列设计调取引物；采用调取引物对扩增后的小片段进行第一轮调取扩增，然后首尾合成引物进行第二轮调取扩增，然后将第二轮调取扩增后的片段进行组装即得序列产物。本发明在不损失时间成本的情况下，合成步骤简化、通量提高、成本降低。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 二代 技术 工业化 基因 合成 方法 | ||
【主权项】：
一种基于二代测序技术的工业化基因合成方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：步骤（1）、将待合成的序列拆分成多段小片段，然后用首尾合成引物合成拆分的多段小片段；步骤（2）、采用5’端含有20个随机碱基的扩增用上下游引物对步骤（1）合成的小片段进行扩增，以便为小片段加上随机标签序列；步骤（3）、将步骤（2）扩增后的所有小片段混合，然后采用二代测序技术进行测序，将测序结果进行对比分析，找到与预期完全一致的序列，从而确定该序列两端的随机序列为所需序列，然后根据所需序列设计调取引物；步骤（4）、采用步骤（3）设计的调取引物对步骤（2）扩增后的小片段进行第一轮调取扩增，然后用步骤（1）中的首尾合成引物进行第二轮调取扩增，然后将第二轮调取扩增后的片段进行组装即得序列产物。
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