[发明专利]快速制备海洋小型鱼类或仔稚鱼中期分裂相染色体的方法

摘要

一种快速制备海洋小型鱼类或仔稚鱼中期分裂相染色体的方法，属于海洋生物技术领域，所述方法通过对现有海水鱼类染色体制备方法的改进，以最少量的实验用鱼体表组织制备出大量的分散较好的中期分裂相染色体，以满足各种海洋小型鱼类或仔稚鱼种质鉴定、染色体倍性分析、染色体荧光原位杂交分析、性别控制等研究的需求。本发明方法能克服试验鱼数量少、个体小的限制，从处理试验鱼开始，6～9小时即可观察到结果，操作简单便捷，可灵活调整制备步骤和处理强度，可在养殖育苗基地或生产单位随时开展，制备染色体后基本保证试验鱼存活下来。

主权项

一种快速制备海洋小型鱼类或仔稚鱼中期分裂相染色体的方法，其特征在于所述方法包括：1)充分了解试验鱼的生物学特性及玻片的清洗；2)把小型试验鱼类或仔稚鱼放入秋水仙素溶液中游泳；3)取试验鱼的鳃组织或鳍条组织进行染色体制备；所述的充分了解试验鱼的生物学特性及玻片的清洗：了解试验鱼的体型特征、营养组成、游泳活动方式和生活方式，以确定取样部位和试验方案，确定取样部位及试验方案的标准如下：鳍条短小者在鳍条游离末端取样，鳍条如蝉翼透明革质或角质则不适合取样，改取鳃丝，鳍条脂肪含量高的应加大低渗力度，选用0.0375M或0.05M KCl低渗液，鳃盖开口度大的取鳃丝游离端，运动激烈的试验鱼游泳水体要求1.5L以上，静止不动的试验鱼鱼游泳水体要求100‑200ml；染色体制片的载玻片要求干净无油污，不挂水，在染色体制备前清洗干净；所述的把小型试验鱼类或仔稚鱼放入秋水仙素溶液中游泳：配制含0.005％或0.01％(g/ml)秋水仙素的海水，让试验鱼在其中游泳4‑6小时，游泳水体的水温较原暂养水温提高或降低2‑3℃，以刺激增强试验鱼体表组织分裂增生的能力；所述的取试验鱼少量鳃组织或鳍条组织进行染色体制备：取1‑8mm3鳃组织或鳍条组织，立即放入0.0375M、0.05M或0.075M KCl溶液中低渗50min，再转移至新鲜配制预冷的卡诺氏固定液中固定，每一步骤过程中都需要轻轻摇晃处理样品的试管，使作用更充分；然后采用热滴片法制片。