[发明专利]土壤厌氧氨氧化微生物群落结构检测方法

摘要

本发明公开了一种土壤厌氧氨氧化微生物群落结构检测方法，包括以下步骤：设置6个容器，每个容器分别依次进行如下内容：在容器中装入待测土壤、¹³C‑尿素溶液和KNO₃溶液，均匀搅拌，再加水调至泥浆态，并封闭容器；用惰性气体替换掉容器中的空气，然后放入厌氧培养箱进行厌氧培养；所得的6个容器分别培养不同时间后，取土测量，根据NO₃^‑‑N，NH₄⁺‑N的含量变化速率，选取变化速率最高的培养阶段所对应的容器中的土壤，提取其中的PLFA；通过气相色谱‑燃烧‑同位素比率质谱联用法测定提取出的PLFA中¹³C的丰度D¹³C，从而获知土壤厌氧氨氧化微生物群落结构。

主权项

1.土壤厌氧氨氧化微生物群落结构检测方法，其特征是包括以下步骤：设置6个容器，每个容器分别依次进行如下的步骤1)～步骤4)：1)、在每个容器中加入30g新鲜的待测土壤和1.2mL浓度为5g/L的13C‑尿素溶液，均匀搅拌，从而使土壤中13C‑尿素‑N的浓度达到200mg/kg；2)、向步骤1)所得的每个容器的土壤中加入1.2mL浓度为5g/L的KNO3溶液，均匀搅拌，从而使土壤中NO3－‑N浓度达200mg/kg；3)、向步骤2)所得的土壤中加水调至泥浆态，并封闭容器；4)、用惰性气体替换掉容器中的空气，然后放入厌氧培养箱进行厌氧30±1℃培养；5)、将步骤4)所得的6个容器分别培养1～2h，1d，3d，7d，10d，直至NO3‑‑N、NH4+‑N值稳定的那天；对6个培养阶段对应的容器分别进行内容：取土，使用SKALAR连续流动分析仪测定土壤NO3‑‑N和NH4+‑N含量；6)、根据NO3‑‑N，NH4+‑N的含量变化速率，选取变化速率最高的培养阶段所对应的容器中的土壤，提取其中的PLFA，PLFA为磷脂脂肪酸；变化速率最高的培养阶段的判断规则为：6个培养阶段的土壤在相同培养时间内NO3‑‑N，NH4+‑N的浓度下降值最高的培养阶段为变化速率最高的培养阶段，若NO3‑‑N，NH4+‑N的变化速率不一致，则取二者变化速率的均值最大的为变化速率最高的培养阶段；7)、通过气相色谱‑燃烧‑同位素比率质谱联用法测定提取出的PLFA中13C的丰度D13C，13C的丰度即13C标记的磷脂脂肪酸的丰度。