[发明专利]利用CRISPR/Cas技术获得家蚕丝素重链基因突变体及突变方法和应用在审
| 申请号： | 201610650202.X | 申请日： | 2016-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN106222203A | 公开（公告）日： | 2016-12-14 |
| 发明（设计）人： | 朱亚楠;相辉;王文;陈垒;陈安利;董扬 | 申请（专利权）人： | 云南纳博生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/89 | 分类号： | C12N15/89;C12N15/113;C07K14/435;A01K67/04 |
| 代理公司： | 昆明今威专利商标代理有限公司53115 | 代理人： | 赛晓刚 |
| 地址： | 650502 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas技术获得家蚕丝素重链基因突变体及突变方法和应用。所述突变方法将cas9mRNA和sgRNA混合后显微注射到家蚕卵中，PCR鉴定基因型，筛选出杂合子，杂合子相互交配获得F1代，F1代中出现纯杂合子，将具有表型的蚕进行基因型检测，将相同基因型的蚕进行交配，筛选出能稳定遗传到下一代的纯合子，继而筛选出家蚕丝素重链基因突变体；sgRNA核心序列针对家蚕丝素重链基因1213～1236、1274～1297或1349～1372位点设计而成。本发明快速、高效的获得了有经济价值和科研价值的实验材料，为家蚕丝胶茧的规模化生产以及家蚕作为生物反应器表达外源蛋白提供了新材料。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 crispr cas 技术 获得 家蚕 丝素 基因 突变体 突变 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种利用CRISPR/Cas技术获得家蚕丝素重链基因突变体的突变方法，其特征在于，将cas9mRNA和sgRNA混合后显微注射到家蚕卵中，PCR扩增后鉴定基因型，筛选出杂合子，将杂合子相互交配获得F1代，F1代中出现纯杂合子，将具有表型的蚕进行基因型检测，将相同基因型的蚕进行交配，筛选出能稳定遗传到下一代的纯合子，继而筛选出家蚕丝素重链基因突变体；所述sgRNA的核心位点序列针对家蚕丝素重链基因+1213～+1236、+1274～+1297或+1349～+1372碱基位点设计而成。
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