[发明专利]BrdU标记免疫荧光检测细胞增殖的改良方法有效
| 申请号： | 201610646905.5 | 申请日： | 2016-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN107703292B | 公开（公告）日： | 2019-07-12 |
| 发明（设计）人： | 杨琴;余萍萍 | 申请（专利权）人： | 杨琴;余萍萍 |
| 主分类号： | G01N33/533 | 分类号： | G01N33/533;G01N33/532;G01N33/53;G01N1/30 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 400015 *** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种免疫荧光检测BrdU标记增殖细胞的改良方法。将变性温度固定在4℃，复性统一采用0.01M Tris‑HCL处理，之后进行单标、双标及三标染色，并与常规方法进行比较。结果显示本发明方法具有非常好的染色效果，成功率高，重复性好，操作简单且节约实验时间。 | ||
| 搜索关键词： | brdu 标记 免疫 荧光 检测 细胞 增殖 改良 方法 | ||
【主权项】：
1.BrdU标记免疫荧光检测细胞增殖的改良方法，其具体步骤如下：a、破膜：取组织切片室温下晾15分钟，然后加0.4％triton室温下反应20分钟；b、修复：经过步骤a处理后的组织切片PBS洗5分钟/3次，用0.01mmol/L枸橼酸盐进行微波热修复，大火5分钟，小火20分钟，待自然冷却1h；c、变性：经过步骤b处理后的组织切片PBS洗5分钟/3次，加2M HCL于4℃下作用30分钟；d、复性：经过步骤c处理后的组织切片PBS洗5分钟/3次，加0.01M Tris‑HCL室温下反应10分钟；e、封闭：经过步骤d处理后的组织切片PBS洗5分钟/3次，山羊血清封闭2小时；f、孵一抗：经过步骤e处理后的组织切片甩掉多余山羊血清，不洗，加BrdU、DCX/BrdU单抗体4℃孵育过夜；g、孵二抗：经过步骤f处理后的组织切片37℃复温1小时，加二抗37℃孵育1小时；h、复核：经过步骤g处理后的组织切片PBS洗5分钟/3次，DAPI复染胞核5‑8分钟；i、封片：经过步骤h处理后的组织切片PBS洗5分钟/3次，甘油封片；其特征在于：将变性温度固定为4℃，复性统一采用0.01M Tris‑HCL，进行单标、双标及三标染色。
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