[发明专利]一种海藻多糖P155及其制备工艺

摘要

本发明提供一种海藻多糖P155及其制备工艺，采用多级串联柱纯化方式，上样液在层析柱间依次流动，溶液中乙醇有助于杂质的溶解，而使需要去除的杂质分别吸附在不同介质的层析柱上，海藻多糖最终吸附在阴离子交换柱上，实现一次性洗脱收集，极大地简化了纯化工艺流程；制备工艺不采用季铵盐等有机试剂，减少了安全隐患，取消了繁杂的有机试剂去除过程，体现了绿色环保的生成理念实现无污染排放等特点；本发明制备工艺降低了生产成本，是一种无污染、低成本、简洁实用的海藻多糖的制备工艺。

主权项

1.一种海藻多糖P155的制备工艺，包括以下步骤：1）将海带洗净后剪碎，60~90℃烤箱脱水干燥，用粉碎机破碎成细颗粒，过30目筛网；2）热水浸提：海带颗粒按4~6倍体积加入纯净水，在回流提取装置中80~85℃浸提3~6小时，反复浸提2次，减压浓缩，合并浸提液；3）滤液收集：浸提液用纱布过滤，收集过滤清液；4）调酸沉淀：用盐酸将过滤清液调节至pH 2.0，搅拌均匀；5）离取上清：将调酸的浸提液8000rpm离心30分钟，收集上清液；6）调碱中和：用氢氧化钠将上述离心上清液调节至中性；7）超滤浓缩：用100kD超滤膜包进行循环浓缩，同时进行纯水置换除盐；8）低温醇析：将浓缩液用无水乙醇调整至浓度85%，低温醇析；9）析出分离：醇析液3000rpm离心20分钟，吸去上清，保留粗多糖结晶沉淀；10）乙醇洗涤：用无水乙醇将粗多糖结晶离心洗涤2次；11）粗多糖收集：将收集到的粗多糖结晶自然干燥；12）大孔树脂去杂质：将粗多糖按1g/20mL比例溶解于6%乙醇水中,过AB‑8大孔树脂去除杂质；13）大孔树脂去蛋白：将步骤12)的柱流出液直接通过HPD‑600大孔树脂，进一步去除粗多糖中色素，同时去除粗多糖中的蛋白质；14）离子交换柱层析：将步骤13）的柱流出液直接通过平衡好的DEAE Sepharose CL‑6B阴离子层析柱，用0.2mol/L NaCl冲洗层析柱，用0.2‑1mol/L NaCl溶液对吸附在离子交换柱上的多糖进行线性洗脱，收集第二个主要洗脱峰组分；15）凝胶过滤柱层析：将步骤14）离子交换层析分离组分浓缩后，过0.05mol/L NaCl平衡过的Sephadex G‑200凝胶过滤柱层析，对离子交换层析分离组分进行进一步纯化；16）超滤浓缩：步骤15）的纯化液用100kD超滤浓缩除盐；17）真空干燥：对浓缩后的海藻多糖进行真空干燥或冷冻干燥, 即得。