[发明专利]一种工程化敷料的制备方法

摘要

本发明涉及一种工程化敷料的制备方法，所述制备方法包括毛发角蛋白的制备、细胞组织的制备以及敷料的制备。本发明的工程敷料是一种效果极佳的创面覆盖物，其有效阻止细菌感染，加速创面愈合，具有良好的生物相容性，控制和吸收创面渗液，透气性强，适合气体和水蒸气透过，保护新生组织，无毒副作用等优势；更重要的是，该工程敷料能自行溶解被机体吸收，免除了解除时流血多及病人的痛苦，也不会留下碎屑而延缓伤口的愈合，为促进皮肤的再生提供一个有利于创面愈合的环境。

主权项

一种工程化敷料的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括毛发角蛋白的制备、细胞组织的制备以及敷料的制备，具体方法如下：(1)毛发角蛋白的制备，该毛发角蛋白为毛发角蛋白颗粒或毛发角蛋白凝胶：①毛发角蛋白颗粒的制备S1：脱脂与软化：称取毛发进行脱脂和软化；S2：脱色：将软化后的毛发放置于脱色溶液中进行脱色，所述脱色溶液的成分为焦磷酸钠3～5重量份、过硫酸钾1～2重量份、双氧水70～90体积份、浓氨水22～33体积份以及水350～450体积份；S3：清洗、烘干：将脱色后的毛发进行清洗，并且干燥；S4：粉末制备：在干燥后的毛发剪碎，并加入液氮冷冻研磨，得到长度为0.1～2mm的毛发粗粉；将粗粉放在球磨罐中，放入玛瑙珠，加入生理盐水，旋转，球磨，直至粒径50μm～90μm为止，则为毛发角蛋白颗粒匀浆；S5：离心：在匀浆中加入生理盐水进行离心，弃去上清液，并去除沉淀的表层和底层，取中段颗粒大小均匀的毛发角蛋白，加生理盐水混匀继续离心，重复上述操作2～4次，最后仍然取中段颗粒大小均匀的毛发角蛋白，则得到为高纯度的毛发角蛋白泥；S6：灭菌：包装，密封，采用钴60辐照法灭菌，保存，待用；②毛发角蛋白凝胶的制备将步骤S6中灭菌后的毛发角蛋白泥加入水，充分混匀，放置于温箱中孵育2‑3小时，至呈现较为均一的颜色和性状为止；灭菌，得到毛发角蛋白凝胶；(2)细胞组织的制备①细胞原代培养：A：取动物皮肤组织，生理盐水冲洗干净，加入分离酶酶消化液4℃过夜；B：去表皮，得组织块，将组织块剪切成小块，加胶原酶消化液(5～10％的I型胶原酶)消化1.5～4小时后，取消化液并转移至离心管中进行离心，该胶原酶消化液中含有5～10％的I型胶原酶；C：去掉上清液，沉淀下来的细胞用含15％血清DMEM悬浮，种在培养皿中，每隔2天换液一次；②传代细胞的扩增培养a：去掉培养皿中的上清液，加胰蛋白酶消化，细胞收缩至圆球形时，去掉消化酶，加入含血清的DMEM培养液悬浮细胞，并进行细胞扩增；b：传代细胞扩增至培养皿面积的60～80％时，再继续传代培养，按照每毫升扩增至含细胞数量105～106的标准进行传代培养；(3)敷料的制备：将步骤(1)中制备的毛发角蛋白与步骤(2)中得到的细胞组织混合均匀，得到工程辅料。