[发明专利]大肠杆菌周质空间表达抗TNF抗体Fab片段的提取方法有效
| 申请号： | 201610569962.8 | 申请日： | 2016-07-19 |
| 公开（公告）号： | CN106188290B | 公开（公告）日： | 2019-06-07 |
| 发明（设计）人： | 童梅;张宇萌;周敏毅;陆小冬;莫婷;刘金毅 | 申请（专利权）人： | 北京三元基因药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/24 | 分类号： | C07K16/24 |
| 代理公司： | 北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250 | 代理人： | 张杰 |
| 地址： | 102600 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明属于生物医药领域，涉及大肠杆菌周质空间表达抗TNF抗体Fab片段的提取方法。所述的提取方法是用含有醋酸钠、EDTA和氯化钠的提取液提取发酵获得的表达抗TNF抗体Fab片段的重组大肠杆菌工程菌，并在将所述的提取液与所述的发酵获得的重组大肠杆菌工程菌混合后调节pH至8.0‑9.5之间进行提取。用本发明的提取方法提取大肠杆菌周质空间表达抗TNF抗体Fab片段，可以在保证提取目标蛋白质收量的基础上尽量提高提取目标蛋白质的纯度，从而降低后续蛋白质层析纯化的难度和/或成本，使后续蛋白质层析纯化的方案易于设计和实现。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 空间 表达 tnf 抗体 fab 片段 提取 方法 | ||
【主权项】：
1.大肠杆菌周质空间表达抗TNF抗体Fab片段的提取方法，其特征是用含有醋酸钠、EDTA和氯化钠的提取液提取发酵获得的表达抗TNF抗体Fab片段的重组大肠杆菌工程菌，并在将所述的提取液与所述的发酵获得的重组大肠杆菌工程菌混合后调节pH至8.0‑9.5之间进行提取，其中：所述的提取液中醋酸钠的浓度为20‑100mM，EDTA的浓度为10‑50mM，氯化钠的浓度为20‑100mM；所述的发酵获得的表达抗TNF抗体Fab片段的重组大肠杆菌工程菌与所述的提取液的质量体积比为1:5‑1:15；提取温度为4‑37℃，提取时间为16‑48小时；所述的大肠杆菌工程菌为BL21(DE3)，表达抗TNF抗体Fab片段的基因位于重组质粒载体pET30a内；所述的抗TNF抗体Fab片段的重链氨基酸序列如SEQ ID No:7所示，与之对应的轻链氨基酸序列如SEQ ID No:8所示。
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