[发明专利]Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒样颗粒的制备方法在审
| 申请号： | 201610519642.1 | 申请日： | 2016-07-01 |
| 公开（公告）号： | CN106047824A | 公开（公告）日： | 2016-10-26 |
| 发明（设计）人： | 王安平;朱善元;王永娟;左伟勇;吴双;郭长明;秦枫;洪伟鸣 | 申请（专利权）人： | 王安平;朱善元 |
| 主分类号： | C12N7/04 | 分类号： | C12N7/04;C12N15/866 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 225300 江苏省泰州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒样颗粒的制备方法。本发明将Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒结构蛋白前体基因P1和蛋白水解酶基因3CD在杆状病毒表达系统中共表达，制备并鉴定了鸭肝炎病毒样颗粒，为鸭肝炎病毒新型疫苗的研制奠定了基础。IFA结果显示重组蛋白在昆虫细胞中成功表达；以P3代病毒(MOI＝5)感染悬浮生长的昆虫细胞，收集细胞裂解液上清，可见直径约20～25nm的球形病毒样颗粒，与DHV天然病毒高度相似；Western blotting分析病毒样颗粒的结构组成，以Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒鸭多抗血清作为一抗，可见特异性结构蛋白条带，与理论值相符。本发明操作程序简便，易进行大规模生产，具有广阔的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 型鸭甲型 肝炎 病毒 颗粒 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒样颗粒的制备方法，特征在于包括以下步骤：(1)将Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒结构蛋白前体基因P1和蛋白水解酶基因3CD克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual中，得到杆状病毒转移载体pFBD‑P13CD；(2)pFBD‑P13CD重组质粒的转座；(3)重组Bacmid DNA的获得与鉴定；(4)重组杆状病毒rBac‑P13CD的制备及扩增；(5)重组杆状病毒rBac‑P13CD感染宿主细胞制备病毒样颗粒；(6)病毒样颗粒的纯化。
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