[发明专利]一种可实现亚硝态氮富积的异养硝化工程菌及其构建方法在审
| 申请号： | 201610493627.4 | 申请日： | 2016-06-22 |
| 公开（公告）号： | CN106148377A | 公开（公告）日： | 2016-11-23 |
| 发明（设计）人： | 金展;张业健;赵敏;郑向勇;刘玉香;薛遥;吕存红;温兴泉;邹慧熙;王圣钦;陈琼珍;王传花;王奇;柯强;余超超 | 申请（专利权）人： | 温州大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N1/20 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提出了一种可实现亚硝态氮富积的异养硝化工程菌的构建方法，构建方法按如下：一，筛选出以NO2‑‑N为主要硝化产物的异养硝化菌为供试菌；二，对供试菌进行全基因组序列测序分析，识别确定其基因序列中需要敲除的亚硝酸盐还原酶基因及所有同源性基因序列的位置；三，利用PCR技术对识别出的亚硝酸盐还原酶基因序列进行扩增，得到同源臂序列，并将其链接到带有标记基因的载体中构成供体菌，然后供体菌、供试菌接种培养，最终采用标记基因的特异位点表达法获得成功敲除亚硝酸盐还原酶基因的菌株；四，重复步骤三的操作，直至所有同源性基因序列都被成功敲除，最终获得的即为构建出的可实现NO2‑‑N富积的异养硝化工程菌。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 实现 亚硝态氮富积 硝化 工程 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种可实现亚硝态氮富积的异养硝化工程菌的构建方法，其特征在于：所述异养硝化工程菌的构建方法按以下步骤进行：(1)，筛选出以NO2‑‑N为主要硝化产物的异养硝化菌为基因敲除技术的供试菌；(2)，对筛选分离出的供试菌进行全基因组序列测序分析，识别确定其基因序列中需要敲除的目的基因——亚硝酸盐还原酶基因(nir)序列和所有同源性基因序列的位置；(3)，利用PCR技术对识别出的亚硝酸盐还原酶基因序列进行扩增，得到亚硝酸盐还原酶基因(nir)敲除所需的同源臂序列，并将同源臂序列链接到带有标记基因的载体中构成供体菌，然后利用三亲结合技术将供体菌、供试菌接种培养，最终采用标记基因的特异位点表达法获得成功敲除亚硝酸盐还原酶基因(nir)的菌株；(4)，对供试菌内的同源性基因序列做重复上述步骤三的操作，直至所有同源性基因序列都被成功敲除，最终获得的即为构建出的可实现NO2‑‑N富积的异养硝化工程菌。
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