[发明专利]一种高效刺激活化T细胞的方法

摘要

一种高效刺激活化T细胞的方法。使用所述刺激活化T细胞的方法，只需要20ml‑80ml的外周血，或者2×10⁷‑5×10⁷细胞即可，对人几乎无影响；另外，所述刺激活化T细胞的方法能够激活扩增T细胞500‑1000倍，CD3+，CD56+双阳性的T细胞比例可达40％‑80％，明显高于现有技术。

主权项

一种高效刺激活化T细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：A、采集人外周血作为标本；B、将所述标本加入淋巴细胞分离液混合均匀，室温下离心，离心后标本分出单个核细胞层；C、吸取单个核细胞层中的液体至离心管中，加入无血清培养基培养，然后离心、洗涤，洗涤后去除上清液，加入磁珠混合5‑10min，混合后在分离柱中去除非T细胞；D、使用含有300‑1000U/mL IL‑2、1‑3wt％L‑Glu、1‑3wt％丙酮酸钠、1‑3wt％非必须氨基酸、10‑50mmol/L Hepes和2‑5％人血白蛋白的无血清培养液重悬步骤C得到的细胞，得到细胞悬液，所述细胞悬液中的细胞浓度为5×10⁵‑1×10⁶cells/ml；所述非必须氨基酸不含L‑Glu；E、在多孔板中，加入D‑PBS、单克隆抗体OKT3和单克隆抗体CD28，混合均匀，并在3‑5℃保存20‑28小时，得到单抗稀释液；F、将所述单抗稀释液加入所述细胞悬液中，并补加干扰素γ和IL‑15，混合均匀后置于35‑39℃、体积百分比为5‑7.5％CO₂培养箱中培养20‑28小时，得到细胞培养液Ⅰ；G、向细胞培养液Ⅰ中补加含有300‑1000U/mL IL‑2，1‑3wt％L‑Glu，1‑3wt％丙酮酸钠，1‑3wt％非必须氨基酸，10‑50mmol/L Hepes和2‑5wt％人血白蛋白的无血清培养液，并补加IL‑1α、单克隆抗体OKT3和单克隆抗体CD28；得到细胞培养液Ⅱ；H、从步骤F开始，每隔两天用培养液半量换液；I、从步骤F开始，培养10‑14天后，收集T细胞，经过离心、洗涤之后，即得到活化的T细胞。