[发明专利]一种原核表达载体的培养方法

摘要

本发明涉及一种原核表达载体的培养方法，属于突变或遗传工程技术领域。以大肠杆菌的“偏好”和“排斥”的密码子分别对人和蟾蜍PPDPF的ORF序列进行密码子优化，分别获得优化后人和蟾蜍的PPDPF重组质粒；转化至大肠杆菌感受态细胞中；挑取单菌落接种于已加入Kanamycin的LB液体培养基中培养形成菌液；菌液按1%接菌于灭菌过的LB培养液中，260rpm于37℃震荡培养至OD₆₀₀达到0.7‑1，按1/1000的比例加入浓度不同的诱导剂IPTG，诱导两种重组蛋白的表达。将发明应用于原核表达系统，具有可实现定点突变等优点。

主权项

一种原核表达载体的培养方法，其特征在于：（1）原核表达载体的构建：以大肠杆菌的“偏好”和“排斥”的密码子分别对人和中华大蟾蜍PPDPF的ORF序列进行密码子优化和合成，并连接到表达载体pET‑28b (+)上，分别获得密码子优化后的人和中华大蟾蜍的PPDPF重组质粒；（2）重组蛋白的诱导表达：将步骤（1）的PPDPF重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞中，37℃过夜培养获得大量单菌落；挑取单菌落接种于已加入Kanamycin的LB液体培养基中，37℃过夜震荡培养形成菌液；菌液按1%接菌于灭菌过的LB培养液中，260rpm于37℃震荡培养至OD值达到0.7‑1，取出一部分菌液作为对照组，其余菌液等分为四组，按1/1000的比例加入浓度不同的诱导剂IPTG，将所有菌液再放回恒温培养箱中37℃260rpm培养1‑4h，诱导两种重组蛋白的表达。