[发明专利]谷氨酸脱氢酶的重组基因及其获取方法与应用

摘要

本发明涉及谷氨酸脱氢酶的重组基因及其获取方法与应用。目前食品中高级醇降解的专一性较差，且限制了酸性条件高级醇的降解，菌体中酶产量低、耗时长、成本高，不能满足工业化生产。本发明将能够在酸性条件下高效降解高级醇的白地霉T3d329TF（Galactomyces geotrichum）菌株中的谷氨酸脱氢酶基因的保守区及全长序列进行克隆、表达和重组酶活性验证。本发明利用能够在酸性条件下降解正己醇和异戊醇的重组酶为催化剂定向降低食品中，尤其是酸性食品中的高级醇含量，安全环保，可控性强，生产成本低，适合大规模工业生产。

主权项

1.一种谷氨酸脱氢酶在定向降低食品中高级醇含量方面的应用，其特征在于：所述高级醇为正己醇和异戊醇，所述谷氨酸脱氢酶由谷氨酸脱氢酶重组基因定义，所述谷氨酸脱氢酶重组基因由以下方法获取：步骤一：提取白地霉（Galactomyces geotrichum） T3d329TF菌株的总RNA，并合成cDNA；所述白地霉（Galactomyces geotrichum） T3d329TF于2008年10月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 208167；步骤二：对谷氨酸脱氢酶基因的保守区及全长序列进行扩增和克隆：保守区扩增引物为：GDH‑F1 5'‑GGATCCACGCCGCTCAAGGTC‑3' BamHⅠ；GDH‑R1 5'‑AAGCTTTACCAAGAAATCACCGTGGTC‑3' HindⅢ；全长序列扩增引物为：GDH‑F2 5'‑CGGGATCCATCAAAATGGTCCAGCCTTCC‑3' BamHⅠ；GDH‑R2 5'‑CCCAAGCTTTTACCAGAAATCACCGTGGTCG‑3' HindⅢ；步骤三：对谷氨酸脱氢酶基因的保守区和全长序列进行表达，包括重组表达载体的构建和酶基因在大肠杆菌中的诱导表达。