[发明专利]一种依次提取和分级盐析纯化鸡爪皮胶原蛋白的方法

摘要

本发明一种依次提取和分级盐析纯化鸡爪皮胶原蛋白的方法，属于食品生物利用领域。将去除可见脂肪的鸡爪皮清洗，低温风干，剪成小块。浸泡在NaCl的Tris‑HCl缓冲液中除去杂蛋白、脂肪。预处理后的鸡爪皮浸泡于预冷的NaCl中性盐溶液中，搅拌离心后。沉淀浸泡于乙酸中提取酸溶性胶原蛋白，离心取沉淀浸泡于酶溶液中提取酶溶性胶原蛋白。三步的上清液分级盐析，透析，冻干即得到较纯的盐溶性胶原蛋白，酸溶性胶原蛋白和酶溶性胶原蛋白。本发明利用一种溶液可对原料进行预处理高效节约，利用分级提取，原料利用率更高，并且可按不同使用范围选择对应的胶原蛋白，分级盐析可得到纯的I型胶原蛋白且除去胶原蛋白里面的酶残留。

主权项

一种依次提取和分级盐析纯化鸡爪皮胶原蛋白的方法，其特征在于按照下述步骤进行：（1）原料的预处理剥下鸡爪上的皮，切除可见脂肪，自来水洗干净，低温风干，剪成小块；浸泡在NaCl的Tris‑HCl缓冲液中除去杂蛋白，色素和脂肪，搅拌，取离心后沉淀；（2）盐溶性胶原蛋白提取预处理的鸡爪皮浸泡于预冷的NaCl的Tris‑HCl缓冲液中，搅拌，提取，离心上清液即盐溶性胶原蛋白粗提液；离心沉淀用蒸馏水冲洗；（3）酸溶性胶原蛋白提取盐提后离心所得沉淀浸泡于预冷的乙酸溶液中，搅拌，提取，离心上清液即酸溶性胶原蛋白粗提液；离心沉淀用蒸馏水冲洗；（4）酶溶性胶原蛋白提取酸提后所得沉淀浸泡于预冷的胃蛋白酶溶液中，搅拌，提取，离心上清液即酶溶性胶原蛋白粗提液；（5）胶原蛋白的提纯盐溶性胶原蛋白粗提液中先添加HCl搅拌，缓慢的边搅拌边加入NaCl直至其完全溶解，进行第一次盐析过夜，离心，沉淀即盐溶性胶原蛋白粗品，溶解于乙酸中；酸溶性胶原蛋白粗提液中直接加NaCl，同上步操作进行第一次盐析过夜，离心，收集的沉淀即酸溶性胶原蛋白粗品，溶解于乙酸中；酶溶性胶原蛋白粗提液直接加NaCl，同上步操作进行第一次盐析过夜，离心，所得沉淀酸溶性胶原蛋白粗品，用NaCl的Tris‑HCl缓冲液溶解，溶解胶原蛋白的同时中性环境使胃蛋白酶残留失活；上述三种溶解后的胶原蛋白溶液，离心取上清液，再次加入NaCl进行第二次盐析，离心收集沉淀溶解于适量乙酸中，蒸馏水透析，真空冷冻干燥得较纯的胶原蛋白冻干品。