[发明专利]一种烟叶中11种着色剂的高效液相色谱测试方法

摘要

本发明涉及一种烟叶中11种着色剂的高效液相色谱测试方法，属于烟草检验技术领域。本发明的烟叶中11种着色剂的高效液相色谱测试方法，包括如下步骤：将烟叶浸取、过滤制得待测溶液；采用高效液相色谱法对待测溶液进行分析，色谱柱采用C18色谱柱，采用紫外检测器进行检测，外标法进行定量；流动相A为乙酸铵溶液，流动相B为乙腈，流动相采用梯度洗脱程序；根据待测溶液的分析结果及标准曲线计算烟叶中的着色剂的含量。本发明的测试方法能将烟叶中的11中着色剂准确检测出来，灵敏度和准确性高，重复性好。

主权项

1.一种烟叶中11种着色剂的高效液相色谱测试方法，其特征在于，包括如下步骤：1）将烟叶浸取、过滤制得待测液；所述待测溶液的制备方法包括：将烟叶加入水中浸取、过滤得水相待测液，2g烟叶对应25mL水；将烟叶加入有机溶剂中浸取、过滤得有机相待测液，2g烟叶对应25mL有机溶剂，所述有机溶剂为甲醇；所述水相待测液和有机相待测液分别进行液相色谱检测；所述烟叶在浸取前在40℃‑60℃温度下烘干10‑12h，然后研磨；2）采用高效液相色谱法对待测液进行分析，色谱柱采用C18色谱柱，采用紫外检测器进行检测，外标法进行定量；流动相A为乙酸铵溶液，流动相B为乙腈，流动相梯度洗脱程序为：初始A为95%，B为5%；10min时A为55%，B为45%；20min时A为55%，B为45%；21min时A为5%，B为95%；25min时A为5%，B为95%；26min时A为95%，B为5%；30min时A为95%，B为5%；总洗脱时间为30min；所述紫外检测的波长采用如下设置：0~4min：427nm，4.35min: 511nm，9.0min: 625nm，9.8min：511nm，15min：427nm；所述色谱柱温度为30℃‑40℃，进样量为10μL，流速为1.0mL/min；所述乙酸铵溶液为浓度为0.02mol/L的乙酸铵水溶液；3）将步骤2）中待测溶液的测试结果代入标准曲线计算烟叶中的柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、亮蓝、赤藓红、去二甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量；用来绘制标准曲线所用的系列标准工作溶液为水溶性系列标准溶液和脂溶性系列标准溶液，水溶性系列标准溶液中柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、亮蓝、赤藓红的浓度均为0.50‑10.0µg/mL，脂溶性系列标准溶液中二甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的浓度均为0.50‑10.0μg/mL。