[发明专利]一种快速制备树突状细胞的改良方法在审
申请号: | 201610334107.9 | 申请日: | 2016-05-19 |
公开(公告)号: | CN105861438A | 公开(公告)日: | 2016-08-17 |
发明(设计)人: | 郑秀娟;储以微 | 申请(专利权)人: | 上海君微生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/0784 | 分类号: | C12N5/0784 |
代理公司: | 北京连城创新知识产权代理有限公司 11254 | 代理人: | 刘伍堂 |
地址: | 200023 上海市虹*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明涉及生物技术领域,具体地说是一种快速制备树突状细胞的改良方法。一种快速制备树突状细胞的改良方法,其特征在于:具体改良方法步骤如下:取患者自体血,分离出红细胞、单个核淋巴细胞、血浆;调整单个核淋巴细胞的浓度;将调整好浓度的单个核淋巴细胞加入6孔板中,贴壁过夜;次日,留下未成熟的树突状细胞;在6孔板的每个孔内加入DC‑1培养基,培养48小时;再在6孔板内加入DC‑2培养基,继续培养24小时;获得成熟树突状细胞;检测成熟树突状细胞的数量、细胞活力和细胞表型及功能。同现有技术相比,用自然贴壁的方法获取DC,诱导时间短,成本低,无毒副作用,DC细胞的活力大于90%,纯度可达80~90%,有相同的效果,更适合推广临床使用。 | ||
搜索关键词: | 一种 快速 制备 树突 细胞 改良 方法 | ||
【主权项】:
一种快速制备树突状细胞的改良方法,其特征在于:具体改良方法步骤如下:(1)取患者自体血20毫升,用淋巴细胞分离液分离出红细胞、单个核淋巴细胞、血浆;(2)用无血清培养基调整单个核淋巴细胞,浓度为1x107/ml;(3)将调整好浓度的单个核淋巴细胞以3ml/孔的体积加入6孔板中,贴壁过夜,时间为16小时;(4)次日,吸弃6孔板内的上层未贴壁的细胞,在每孔的下层留下未成熟的树突状细胞;(5)在6孔板的每个孔内加入DC‑1培养基,体积为2.82ml/孔,置于二氧化碳浓度为5%,温度为37°C,培养48小时;(6)再在6孔板内加入DC‑2培养基,体积为180ul/孔,继续培养24 小时;(7)获得成熟树突状细胞;(8)检测成熟树突状细胞的数量、细胞活力和细胞表型及功能。
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