[发明专利]一种六次甲基四胺的检测方法

摘要

本发明公开了一种六次甲基四胺的检测试剂盒，包括检测卡、胶体金标记六次甲基四胺多克隆抗体复合物以及磷酸盐缓冲稀释液。同时，本发明还提供了一种六次甲基四胺的检测方法和应用。该试剂盒及其检测方法可以定性及半定量检测样品中是否含有待测物以及待测物含量的大致范围。本发明提供的试剂盒中检测卡结构简单，成本低，检测所需时间短，能够同时快速检测大批样品，而且检测结果准确，应用性强，操作简单，可实现腐竹、粉丝、水产品中六次甲基四胺的快速、准确地检测，这对于维护广大消费者利益及保障政府部门的食品安全监管工作具有重大意义。

主权项

一种六次甲基四胺的检测方法，其特征在于，采用试剂盒检测六次甲基四胺，包括以下步骤：所述试剂盒，包括：检测卡；所述检测卡包括硝酸纤维素膜，在所述硝酸纤维素膜上设有一条含六次甲基四胺包被抗原的检测带和一条含有羊抗兔二抗的质控带；胶体金标记六次甲基四胺多克隆抗体复合物；以及磷酸盐缓冲稀释液；（1）预处理待测样品；（2）将所述胶体金标记六次甲基四胺多克隆抗体复合物与磷酸盐缓冲液按1:2混合，将处理后的待测样品与所述胶体金标记六次甲基四胺多克隆抗体复合物和磷酸盐缓冲液的混合物按体积比为1:5混合，得混合液；（3）将所述混合液逐滴加到所述检测卡的检测带与质控带之间的区域上； 静置10‑15min，观察，若质控带和检测带都显红色，则待测样品为阴性，即表明待测样品中不含六次甲基四胺或其含量小于 0.5ng/ml 最低检出限；若仅质控带显红色，则待测样品为阳性，即表明待测样品中含有六次甲基四胺且含量大于所述最低检出限，若质控带均不显色，则该测试无效；所述试剂盒中胶体金标记六次甲基四胺多克隆抗体复合物的制备工艺包括以下步骤：（A）合成六次甲基四胺完全抗原：配制浓度为 200‑300 mg/ml 的六次甲基四胺溶液；配制pH值为7‑10、离子浓度为10‑1000 mmol、含载体蛋白30‑50 mg/ml的复合磷酸盐缓冲液； 所述载体蛋白为牛血清白蛋白；将所述六次甲基四胺溶液滴加到所述复合磷酸盐缓冲液中，再加入体积比浓度为25%的戊二醛水溶液，混匀，室温静置1‑2小时，4℃冰箱过夜，再装入透析袋中，透析 3‑5 天，每天换液 1‑2 次，得六次甲基四胺完全抗原；所述六次甲基四胺:复合磷酸盐缓冲液:戊二醛水溶液质量体积比为：80‑120 mg : 1‑5ml : 2‑3ml；（B）制备六次甲基四胺多克隆抗体：用所述六次甲基四胺完全抗原进行动物免疫，获得六次甲基四胺多克隆抗体；（C）制备胶体金溶液：将100 ml质量比浓度为0.01%的HAuCl4 的水溶液边搅拌边加热至沸腾，保持煮沸2‑3 min，搅拌，加入1.2 ml质量比浓度为1%的柠檬酸三钠水溶液，待溶液颜色变为透明的红色并不再变化时，保持煮沸 15 min，停止加热，搅拌，冷却至室温，添加蒸馏水恢复溶液至100 ml；（D）制备胶体金标记六次甲基四胺多克隆抗体复合物：调节胶体金溶液的pH值为8‑10， 按体积比1:0.06取所述胶体金溶液和所述六次甲基四胺多克隆抗体，在磁力搅拌下，将所述六次甲基四胺多克隆抗体逐滴加入到所述胶体金溶液中，10‑15 min后向溶液中逐滴加入牛血清白蛋白，使溶液中所述牛血清白蛋白的终浓度达到1‑2%，搅拌 30‑40min，置于4℃下过夜； 在 4℃下1500r/min离心10min，取上清液于4℃下、10000r/min离心30min，弃去上清液，得胶体金标记六次甲基四胺多克隆抗体复合物。