[发明专利]一种易保存生物羊膜的制备方法

摘要

本发明公开了一种易保存生物羊膜的制备方法，属于生物羊膜制备领域。本发明将羊膜清洗酶解，过滤后加入甘油浸泡，并用生理盐水冲洗，得粗生物羊膜，之后取壳聚糖和无菌水，混合加入磷酸溶液，茶多酚、酪蛋白以及过硫酸铵，再次混合加热并加入甲壳素，得混合液，随后将得到的粗生物羊膜浸泡混合液中，通过微波反应，冲洗过滤，置于无菌净化间自然晾干，从而得到易保存生物羊膜的制备方法。实例证明，本发明操作工艺简便，无需特殊仪器，不仅克服了现有羊膜材料较薄，机械强度较差，易撕裂的缺陷，而且制得的生物羊膜无生物学毒性，具有较好的相容组织性，可在常温下长期保存，保存时间延长至3～5年，使用方便，可规模化生产。

主权项

1.一种易保存生物羊膜的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）取新鲜羊膜，使用水将其表面清洗干净，将清洗后的羊膜浸泡于质量分数为4～6％乳酸溶液中，并置于超声振荡器中，在23～25KHz下振荡50～70min后进行过滤，使用蒸馏水淋洗羊膜表面，直至淋洗液pH为7.0，将淋洗后羊膜与羊膜质量3～5％胰蛋白酶，搅拌均匀，在30～35℃下酶解5～7h；（2）待上述酶解结束后进行过滤，收集酶解后的羊膜，将笛膜平铺于冰块表面，将酶解后的羊膜平铺于笛膜表面，羊膜下皮面朝下，使用细胞刮子将羊膜上的表面杂质去除，随后将去除杂质后的羊膜浸泡于甘油中，于4～6℃下，静置脱水过夜，再进行过滤，使用生理盐水将过滤后的羊膜冲洗5～7次，得粗生物羊膜，备用；（3）按固液比1:3，取壳聚糖与无菌水搅拌均匀，放入玻璃容器中，再向玻璃容器中加入pH为4.5的磷酸缓冲溶液，加入量为无菌水体积的30～40％，搅拌均匀并静置10～15min，分别向玻璃容器中加入壳聚糖质量50～60％茶多酚、壳聚糖质量1～3％酪蛋白及酪蛋白质量10～15％的过硫酸铵；（4）在上述物质加入后，对玻璃容器进行加热至50～60℃，以150r/min搅拌4～7h后，向其中加入上述壳聚糖质量2～4％甲壳素，搅拌均匀，将步骤（3）所得的粗生物羊膜放入玻璃容器中，使其完全浸泡于玻璃容器中的混合物中，随后将玻璃容器移至微波反应器中10～12h，再进行过滤，使用生理盐水冲洗过滤后的羊膜5～7次，将冲洗后的羊膜置于无菌净化间内，自然晾干，即可得到易保存生物羊膜。