[发明专利]CBLB502-Fc融合蛋白及其制备方法有效
申请号: | 201610284241.2 | 申请日: | 2016-04-29 |
公开(公告)号: | CN105801709B | 公开(公告)日: | 2019-10-08 |
发明(设计)人: | 胡显文;段海峰;陈柯言;陈强;张伟;高丽华;王友亮;邵勇;焦长乐;谭招丽;靳阳;殷慧慧 | 申请(专利权)人: | 北京纽莱福生物科技有限公司 |
主分类号: | C07K19/00 | 分类号: | C07K19/00;C12N15/62;A61K38/16;A61K47/64;A61P35/00;A61P1/00;A61P25/00 |
代理公司: | 北京康思博达知识产权代理事务所(普通合伙) 11426 | 代理人: | 刘冬梅;路永斌 |
地址: | 100070 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明公开了CBLB502‑Fc融合蛋白及其制备方法。该融合蛋白包括CBLB502蛋白和免疫球蛋白Fc片段,所述Fc片段选自人或动物的免疫球蛋白或者它们的亚型。本发明通过构建CBLB502‑Fc融合蛋白的真核表达载体,并转染至真核细胞,获得活性高、稳定性好、半衰期长的融合蛋白,可用于辐射防护、缓解修复化学药物引起的骨髓和胃肠道损伤,以及抗肿瘤等用途。 | ||
搜索关键词: | cblb502 fc 融合 蛋白 及其 制备 方法 | ||
【主权项】:
1.CBLB502‑Fc融合蛋白,包括CBLB502蛋白和免疫球蛋白Fc片段;所述Fc片段选自人免疫球蛋白IgG;所述的融合蛋白的制备方法,包括以下步骤:1)获得编码CBLB502‑Fc融合蛋白的核苷酸序列;2)构建CBLB502‑Fc融合蛋白的表达载体;3)将构建的表达载体转染适宜宿主细胞;4)培养转染细胞,分离CBLB502‑Fc融合蛋白;包含编码融合蛋白的核苷酸序列的表达载体为哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1‑CBLB502‑Fc真核质粒;该表达载体通过将pUC57‑CBLB502‑Fc中的CBLB502‑Fc克隆至pcDNA3.1载体中构建获得;所述宿主细胞为哺乳动物细胞;所述的融合蛋白的制备方法还包括CBLB502‑Fc融合蛋白的纯化:将培养上清用硅藻土混合,吸附细胞碎片和其他杂质,用0.22 μm滤膜过滤去除硅藻土与细胞碎片;用5倍柱体积的结合缓冲液处理Protein A亲和柱,再将处理过的培养上清进行上样;上样完毕后,用平衡缓冲液冲洗杂蛋白至基线,然后用洗脱液洗脱蛋白;所述融合蛋白为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
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