[发明专利]一种基于改良磁珠法快速提取全血中基因组DNA的方法

摘要

本发明涉及一种基于改良磁珠法快速提取全血中基因组DNA的方法。该方法包括以下步骤：红细胞裂解、白细胞裂解及DNA吸附、DNA纯化和DNA洗脱。利用DNA定量仪测定DNA浓度与纯度，利用测序仪对PCR扩增产物进行测序，相关的分析软件进行HLA分型结果分析。本发明具有DNA浓度均一性强、纯度高、HLA分型结果成功率大幅度提高和信噪比合格率高的特点。因此，可广泛地应用于全血样本中基因组DNA的提取中。

主权项

一种基于改良磁珠法快速提取全血中基因组DNA的方法，其特征在于，该方法具体包括步骤如下：（1）红细胞裂解在容积为2ml离心管中加入450‑500µl红细胞裂解液，将120‑150µl完全解冻后的全血样本加入上述离心管中，充分振荡，混匀至细胞碎片均匀悬浮，未见成团聚集，将裂解液×10,000rmp离心1‑3min，除去上清液；（2）白细胞裂解及DNA吸附将蛋白酶K原液倍比稀释，吸取20µl蛋白酶K及120‑150µl Lysis Buffer加入以上离心管中，并反复吹打混匀3次后65℃孵育，振荡2‑3min静止5‑8min，振荡与静止交替进行3个循环；加入250‑300µl的Binding Buffer和20‑30µl的Magnetic Beads置离心管中，抽打混匀或振荡混匀3min；室温离心管架放置3min；将离心管放置磁力架上静置20秒，待磁珠完全吸附时去除液体；（3）DNA纯化将上述离心管从磁力架上取下，加入600‑800µl的Wash1Buffer，抽打混匀或振荡混匀至磁珠悬浮，未见成团成片；将离心管放置磁力架上静置20秒，待磁珠完全吸附时去除液体；将离心管从磁力架上取下，加入600‑800µl的Wash2Buffer，抽打混匀或振荡混匀至磁珠悬浮，未见成团成片；将离心管放置磁力架上静置20秒，待磁珠完全吸附时去除液体；将离心管从磁力架上取下，加入500‑600µl的ddH₂O，抽打混匀或振荡混匀至磁珠悬浮，未见成团成片；将离心管放置磁力架上静置20秒，待磁珠完全吸附时去除液体；将离心管放置磁力架上，室温晾干10～15min；（4）DNA洗脱将上述室温晾干后的离心管从磁力架上取下，加入80～100µl的Elution Buffer，抽打混匀或振荡混匀，置于65℃，孵育8min；将离心管放置磁力架上静置20秒，待磁珠完全吸附时得到DNA溶液，并将DNA溶液转移至收集管中，并‑20℃或‑80℃保存。